水稻種子中蛋白質和淀粉含量的測定
目的意義：
水稻是重要的糧食作物之一，其品質優(yōu)劣是值得人們重視的問題。一個高產(chǎn)水稻品種，往往由于食味差、或營養(yǎng)不豐富，而不受大眾的歡迎。因此，在保證高產(chǎn)的同時，還要改善稻米的品質。本實驗將測定大米品質的幾個重要生化指標，為水稻育種提供理論依據(jù)。
Ⅰ 大米蛋白質含量的測定——考馬斯亮蘭G—250法
一、原理
考馬斯亮G—250是一種染料，在游離狀態(tài)下呈紅色，在465nm波長處有最大光吸收。它能與蛋白質穩(wěn)定結合，結合蛋白質后變?yōu)榍嗌?95nm處有最大吸收，在一定蛋白質濃度范圍內（0～1000μg/ml），蛋白質—色素結合物在595nm波長下的光吸收與蛋白質含量成正比，故可用于蛋白質的定量測定。
該法反應迅速，蛋白質與考馬斯亮蘭G—250的結合反應能在2分鐘內達到平衡。結合物在室溫下1小時內保持穩(wěn)定，反應非常靈敏，可測出微克級蛋白質含量，是最近新發(fā)展起來的一種較理想的蛋白質定量法。
二、實驗材料、儀器及試劑
1．儀器：
721型分光光度計 離心機 50ml容量瓶 10ml刻度試管研缽 量筒 移液管
2．試劑：
（1）牛血清白蛋白（1000μg/ml）：稱取100.00mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸餾水中，配制成標準蛋白質溶液。
（2）考馬斯亮蘭G-250溶液：稱取100ml考馬斯亮蘭G—250，溶于50ml 90%乙醇中，加入85%（W/V）的磷酸100ml，最后用蒸餾水定容到1000ml，過濾，常溫下可放置1個月。
（3）0.1mol/LnaOH：稱取4g氫氧化納，用蒸餾水溶解，并定容至1000ml。
3．材料：大米粉
三、實驗方法
1．標準曲線的制作：
取6只10ml刻度試管，編號，按下表數(shù)據(jù)配制牛血清白蛋白標準溶液。準確吸取上述各管溶液0.1ml，對應放于另外6支10ml刻度試管中，加入5ml考馬斯亮蘭G-250溶液，蓋塞，將試管中溶液給向倒轉混合，放置2分鐘后，用10mm光徑的比色杯在595nm波長下比色。以光密度值為縱坐標，以蛋白質濃度值為橫坐標，制作出標準曲線。
2．樣品中蛋白質提取：
（1）準確稱取稻米粉0.5克，放入研缽中，加2ml0.1mol/L NaOH，研磨成勻漿，轉入到10ml離心管中，再用6ml 0.1mol/ L NaOH分三次洗滌研缽，洗液一并轉入10ml離心管中，用玻棒攪拌，放置30分鐘，放置過程間斷攪動數(shù)次。3500rpm離心15分鐘，上清液轉入50ml容量瓶中，用蒸餾水定容到刻度，搖勻，得堿溶性蛋白。
（2）將上述沉淀用70%乙醇重復提取，操作步驟同上，得醇溶性蛋白。
3．測定：
吸取提取液0.1ml，放入10ml具塞刻度試管中，加5ml考馬斯亮蘭G-250試劑，混勻，放置2分鐘，用10mm光徑的比色杯在595nm波長下比色（比色空白用0.1ml蒸餾水代替提取液與5ml考馬斯亮蘭G-250試劑混合），記錄OD值。然后根據(jù)所測OD595nm在標準曲線上查出所對應的蛋白質濃度（C）。
四、結果計算：
五、注意事項：
（1）由于此方法十分靈敏，因此，所用器皿必須清洗干凈，取樣必須準確，否則會造成很大的誤差。
（2）定容時蒸餾水要沿著管壁緩慢加入，以免產(chǎn)生大量氣泡，造成定容不準確，實驗也會出現(xiàn)誤差。
（3）谷物種子蛋白質主要是谷蛋白和醇溶蛋白，因此，稻米粉蛋白含量應為堿溶性谷蛋白和醇溶性蛋白含量之和。
Ⅱ 旋光法測定大米總淀粉
一、原理
淀粉因含有不對稱碳原子，故具有旋光性。在加熱條件下，淀粉可分散于稀鹽酸溶液中，用磷鎢酸沉淀蛋白質等其他旋光物質后，將溶液定容到一定體積。利用旋光儀測定出淀粉溶液的旋光偏振角。根據(jù)不同作物淀粉的比旋光度
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://www.jyzjsd.com/
服務熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
