固定化酵母細胞及蔗糖酶的檢測
一、實驗目的
1. 學習固定化酵母細胞的方法。
2. 掌握蔗糖酶活力的檢測方法。
二、實驗原理
固相酶又稱為固定化酶，是通過物理及化學的處理方法，使水溶性酶和固態的水不溶性支持物(或載體)相結合而制備的。通過酶的固定化可以將酶轉變成不溶物同時仍保留酶的活力，在催化反應中具有諸多水溶性酶所不具備的優點。
常用的酶的固定化方法主要有：
1. 物理吸附法；
2.載體偶聯法(鍵結合法)；
3.交聯法；
4.包埋法；
就其應用技術而言，又分為固定化酶和固定化細胞二種。
相對于水溶性酶，固定化酶的優點主要是機械強度增加，穩定性提高，可回收反復使用。
三、儀器和試劑
儀器
試管、1毫升吸管4支、水浴鍋。
試劑
1. 海藻酸鈉若干克；
2. K號酵母液；
3. 10％蔗糖液：稱取10克蔗糖用水定容至100毫升；
4. 斐林甲、乙液。
四、操作步驟
l、稱取海藻酸鈉1克加入100毫升水中，微火加熱溶解后冷卻到30℃左右，將預先準備好的3克卡氏酵母(或K號酵母的培養液30毫升)的懸液加入混勻。 然后倒入下邊裝有膠管與止血夾的漏斗中，讓其慢慢滴入4％氯化鈣溶液中，制成直徑2－3毫米的球形固定化酵母。
將此固定化酵母裝入柱中，從柱上端加入10％的蔗糖液，控制一定的流速(10－17滴／分鐘)。先流出的水解液要回流10分鐘。最后所得流出液即為經固定化K號酵母水解的糖液，其成分為葡萄糖和果糖的混合液。
2、蔗糖酶的檢測
吸取斐林甲、乙液各1毫升于干燥試管中，加入水解液1毫升，沸水中保溫，觀察顏色反應。有氧化亞銅沉淀的則說明蔗糖已被水解，管中有蔗糖酶的存在。
空白以10％蔗糖液做對照，其它同上。
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