生化實驗的基本操作
1.配制溶液時,必須隨時攪拌或振蕩混合。配制完了時,必須充分攪拌或振蕩混合。
2.攪拌使用的玻璃攪棒,必須兩頭都燒圓滑。
3.攪棒的粗細長短,必須與容器的大小和所配制的溶液的多少呈適當比例關系。不能用長而粗的攪棒去攪拌小離心管中的少量溶液。
4.攪拌時,盡量使攪棒沿著器壁運動,不攪入空氣,不使溶液飛濺。
5.傾入液體時,必須沿器壁慢慢傾人以免有大量空氣混入。傾倒表面張力低的液體(如蛋白質溶液)時,更需緩慢仔細。
6.振蕩溶液時,應沿著圓圈轉動容器,不應上下振蕩。
7.振蕩混合小離心管中液體時,可將離心管握在手中,以手腕、肘或肩作軸來旋轉離心管; 也可由一手持離心管上端用另一手彈動離心管;也可用一手大拇指和食指持管的上端,用其余三個手指彈動離心管。手指持管的松緊要隨著振動的幅度變化。還可以把雙手掌心相對合攏,住離心管,來回挫動。
8.在容量瓶中,混合液體時,應倒持容量瓶搖動,用食指或手心頂住瓶塞,并不時翻轉容量瓶。
9.在分液漏斗中振蕩液體時,應用一手在適當斜度下倒持漏斗,用食指或手心頂住瓶塞,并用另一手控制漏斗的活塞。一邊振蕩,一邊開動活塞,使氣體可以隨時由漏斗泄出。
10.研磨配制肢體溶液時,要使杵棒沿著研缽的單方向進行,不要來回研磨。
(二)沉淀的過濾和洗滌
1.過濾沉淀一般使用濾紙。
2.應根據沉淀的性質選擇不同的濾紙.膠狀沉淀,應使用質松孔大的濾紙.一般大小顆粒的結晶形成沉淀,應使用致密孔小的濾紙。而極細的沉淀,則應使用致密孔最小的濾紙。濾紙越致密,過濾就越慢。
3.濾紙的大小要由沉淀量來決定,并不是由溶液的體積來決定。沉淀量應裝到濾紙高度的1/3左右。最多不應超過1/2,通常使用直徑為7-9厘米的圓形濾紙。
4.折疊濾紙應先整齊的對折,錯開一點再對折,打開后形成一邊一層,一邊三層的圓錐體。折疊尖端時不可過于用力,以免容易出洞。放入漏斗中時,濾紙邊緣應完全吻合。撕去三層一邊的外面兩層部分的尖端,使濾紙上緣能更好的貼在漏斗的壁上,不留縫隙。而下面部分則有空隙以利于提高過濾速度。
5.濾紙上緣一般應低于漏斗口上周0.5至1厘米。潤濕濾紙時應用指尖輕壓濾紙趕凈濾紙和漏斗間的氣泡,使濾紙緊貼漏斗壁。同時漏斗頸內必須充滿液體,這樣,才可籍液體的重量而對于待液體產生吸濾作用。
6.過渡時,為了防止沉淀堵塞濾紙的孔洞,通常采用傾泄法,即先小心的把溶液傾入漏斗而不使沉淀流入,只在過濾的最后一步才把沉淀轉移到漏斗上。
7.過濾時,將玻璃棒直立在三層濾紙的中間部分,其下端接近但不能觸及濾紙,并使盛器緊貼玻棒,使液體順玻棒緩緩流入漏斗。液體最多加到距濾紙上緣3-4毫米處,過多則沉淀會因濾紙的毛細管作用而爬到漏斗壁上去。
8.在容器中洗滌沉淀一般采用傾注法。洗滌時,采取少量多次的方法最為有效。通常,容易洗滌的粗粒晶形沉淀洗 2—3次,難洗滌的粘稠無定形沉淀則需洗 5—6次。注意,每次都應盡量傾以增加洗滌效率,并防止沉淀流失。
9.轉移沉淀時,先向沉淀中加入濾紙一次所能容納量的洗滌液,攪拌成為混懸液,不要等待沉淀下沉,立即按傾注清液的同樣方式傾入漏斗。容器內剩余的沉淀可以用少量洗滌液按上述方法重復數次,直到全部轉移到漏斗內。
10.在漏斗內洗滌沉淀時,先將沉淀輕輕攤開在漏斗下部,再用滴管(或洗瓶)將洗滌液加入到漏斗上緣稍下的地方,同時轉動漏斗,并使洗滌液沿著漏斗不斷向下移動,直到洗滌液充滿濾紙一半時立即停止。待漏斗中洗滌液完全漏出后,再進行第二次洗滌。通常,完全洗去沉淀所吸附的不擇發物質,約需8—10次左右。確知沉淀已經洗凈,需要進行必要的檢驗。必須注意,沉淀的過濾和洗滌工作一定要一次完成,不可間斷。
(三)烘箱和恒溫箱的使用
烘箱又叫干燥箱,常用的是電熱鼓風干燥箱。干燥箱用于物品之干燥和干熱滅菌,工作溫度為50—250℃。恒溫箱又叫培養箱,用于細菌、生物培養等,工作溫度自室溫以上至60℃。這兩種 儀器 工作原理、結構及使用方法相似。
1.使用方法:
(1)檢查溫度計是否插入座內,應插在放氣調節器中部的小孔內。
(2)把電源插頭插好,合上電閘。
(3)將電熱絲分組開關的旋鈕撥到(l)或(2)(視需要的溫度而定),再將自動恒溫控制旋扭沿順時針方向旋轉,指示燈紅燈亮表示電熱絲開始加熱。此時也可開鼓風機幫助箱內熱空氣對流。
(4)在恒溫過程中,應注意觀察溫度計。待溫度將要達到需要溫度值(差2—3℃)時,使指示燈綠燈正好發亮,此時表示電熱絲停止加熱,箱內溫度即能自動控制在所需要的溫度(±0.5℃)。
(5)恒溫過程中,如不需要多組電熱絲同時加熱時,應將電熱絲分組開關的旋鈕撥到(1)檔。
(6)工作一定時間后需要將潮氣排出,可打開放氣調節器,也可打開鼓風機。
(7)使用完后,關閉鼓風機馬達開關,將電熱絲分組開關旋鈕和自動恒溫控制旋扭沿反時針方向施回至零位。
(8)斷開電閘,將電源插頭撥出插座。
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