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質譜
發布日期:2022-10-31 08:46:26


質譜


質譜技術的基本原理是樣品分子離子化后,根據不同離子間的荷質比( m/e )的差異來分離并確定分子量。其原理并不新鮮,但是在 80 年代早期出現的兩種新的離子化技術,使質譜從僅能分析小分子揮發物質到可以研究生武打分子, 80 年代末又發明了兩種更新的離子化技術,一種是介質輔助的激光解吸 / 離子化( matrix-assisted laser desorption/ionization , MALDI ),另一種是電噴霧離子化( electrospray ionization , ESI )。這些技術能快速而極為準確地測定生物大分子的分子量;在結合各種新的質譜分析技術,便可以在各種水平上研究蛋白質,為蛋白質研究開辟了新的道路,是蛋白質組研究從蛋白質深入到高級結構研究,以及各種蛋白質之間的相互作用研究。

 

另外,對于蛋白質和多肽,質譜的發展還有一個重要的用途是肽的測序。這是采用串聯質譜( Tandem-MS ),即在第一級質譜得到肽的分子離子 , 選取目標肽的離子作為母離子,與惰性氣體碰撞,使肽鏈中的肽鍵斷裂,形成一系列離子,即 N 端碎片離子系列( B 系列)和 C 端碎片離子系列( Y 系列),將這些碎片離子系列綜合分析,可得出肽段的氨基酸序列。最近, Wilm 等應用納噴串聯質譜( nano-electrospray tandem mass spectrometry )能在較低的 fmol 量上測得肽段序列。在 MALDI-MS 方面,近年來可用源后衰變 - 基質輔助激光解吸離子化質譜( post-source decay MALDI-MS , PSD-MALDI-MS )技術測得肽序列。

 

與上述方法測肽序列不同, Chait 等發展一種稱為“ protein ladder sequencing ”的方法,通過對 Edman 降解法的修改,產生一系列截去 N 端殘基的肽段,用 MALDI-MS 測得這些肽段的質量,從而推測 N 端序列。 Patterson 等利用羧肽酶 Y 酶解法并結合 MALDI-TOF MS 質量分析法同樣測得了 C 端得肽序列。 Mann 等用串聯質譜技術分析肽段可得到這樣的信息: N 端段質量、 C 端段質量和中間少數幾個殘基的序列,稱為“肽序列標記”( peptide sequence tag , PST ),并認為這樣的標記比部分肽序列信息在查庫時更具限制性。

 

質譜法有不少優點,還能用于翻譯后修飾的分析(糖基化、磷酰化),但目前只適用于 20 個氨基酸以下的肽段。此外,還存在固有的局限性,譬如 Leu 和 Ile 、 Lys 和 Gln 不能區分,有些肽的固有序列不能用質譜法測定。



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