神經(jīng)元原代培養(yǎng)

從孕17-18天的雌鼠的胎兒分離神經(jīng)元細(xì)胞。孕雌鼠麻醉然后解剖，胎兒收集到HBSS-1中然后快速斷頭。剝離腦膜和白質(zhì)后，大腦皮質(zhì)收集入HBSS-2 液中機(jī)械磨碎。皮質(zhì)碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分鐘。

胰酶消化后，細(xì)胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液沖洗兩次，用神經(jīng)基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸細(xì)胞（培養(yǎng)液添加了0.5mM左旋-谷氨酰胺，25μM左旋-谷氨酸，2%B27和0.12mg/mL慶大霉素）。以1×105cell/cm2接種到事先用多聚賴氨酸包被的培養(yǎng)皿上，放到37°C，5%CO2濕溫培養(yǎng)箱里進(jìn)行培養(yǎng)。

每3天用吸管換液，一次換0.5mL。體外培養(yǎng)8天細(xì)胞就能用于實(shí)驗(yàn)。

選用17-18天的胎鼠能夠提高神經(jīng)元培養(yǎng)的效率，因?yàn)榕c乳鼠相比胚胎組織的細(xì)胞連接還很少。

因此，用乳鼠會(huì)使神經(jīng)元的分離更加困難，會(huì)造成細(xì)胞連接不可逆的損傷，細(xì)胞之間的共同的軸突和樹突更容易發(fā)生損傷。另外，用出生后1天內(nèi)的大鼠皮質(zhì)培養(yǎng)容易有膠質(zhì)細(xì)胞污染，而用胎鼠則可以避免這種情況。如果用的是乳鼠，一般是在培養(yǎng)36個(gè)小時(shí)后加入阿糖胞苷，抑制膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)。

另外，如果把分化的影響看成是考慮的重要因素，可以用培養(yǎng)4天的、8天的、18天的細(xì)胞。其中一個(gè)例子可以是觀察毒性物質(zhì)對(duì)小孩和成年的不同效應(yīng)。

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