細(xì)胞的原代培養(yǎng)

一、原代細(xì)胞培養(yǎng)原理

原代細(xì)胞培養(yǎng)是將機(jī)體內(nèi)的某組織取出，分散成單細(xì)胞，在人工條件下培養(yǎng)使其生存并不斷生長、繁殖的方法。借助這種方法可以觀察細(xì)胞的分裂繁殖、細(xì)胞的接觸抑制以及細(xì)胞的衰老、死亡等生命現(xiàn)象。

? 幼稚狀態(tài)的組織和細(xì)胞，如：動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進(jìn)行原代培養(yǎng)

? 掌握無菌操作技術(shù)

? 了解小鼠解剖操作技術(shù)

? 了解原代細(xì)胞培養(yǎng)的一般方法與步驟

? 了解培養(yǎng)細(xì)胞的消化分散

? 了解倒置顯微鏡的使用

二、實驗材料

? 實驗動物：孕鼠或新生小鼠

? 液體：細(xì)胞生長液（內(nèi)含20%小牛血清）

0.25%胰蛋白酶
平衡鹽溶液
70%乙醇
? 器材：滅菌鑷子、剪刀若干把

滅菌培養(yǎng)皿、細(xì)胞培養(yǎng)瓶、小瓶、燒杯若干個
吸管若干支
酒精燈
原代細(xì)胞培養(yǎng)方法

三、胰酶消化法

（1）胰酶消化法操作步驟——取材

a. 用頸椎脫位法使孕鼠迅速死亡。

b. 把整個孕鼠浸入盛有75%乙醇的燒杯中數(shù)秒鐘消毒，取出后放在大平皿中攜入超凈臺。

c. 用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d. 用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養(yǎng)皿上。

e. 剔除胚胎周圍的包膜（若胚胎較大，應(yīng)剪去頭、爪），將胚胎放于無菌的含有平衡鹽溶液的培養(yǎng)皿中。

f. 漂洗胚胎，去掉平衡鹽溶液。繼續(xù)用平衡鹽溶液漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

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