星型膠質細胞原代培養
新生1-2天Wistar大鼠乳鼠,經75%酒精消毒,斷頭處死,取腦放入冷的D-Hanks平衡鹽溶液,去除腦膜及大血管。
分離兩側大腦皮質并剪成1mm 3 大小,加入0.25%胰蛋白酶37℃空氣浴震蕩消化10 min,用含10% FBS的DMEM培養基終止消化,離心1000rpm 10min,去上清,再用含10% FBS的DMEM培養基重懸沉淀.
經75μm篩網過濾,收集濾液,離心1000rpm 10min,收集沉淀用含10% FBS的DMEM培養基重懸,調整細胞密度至1.5×106/ml,種植于75cm 2 培養瓶,經1小時差速黏附去除成纖維細胞后,將細胞懸液轉移到一新的75cm2培養瓶繼續培養,兩天換液一次。
7天后將培養瓶放入水平搖床,260rpms 2小時 37℃,換液棄除小膠質細胞,放入培養箱平衡1小時,重新置于水平搖床,260rpms 18小時37℃,換液棄除少突膠質細胞,用新鮮培養基洗2遍,加入0.25%胰蛋白酶與0.02% EDTA1:1混合液消化、傳代備用。
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