正常晶狀體上皮細胞原代培養

實驗材料：

1. 材料來源：人眼、兔眼或者豬眼等；

2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；

3. 器械：無齒顯微小鑷子2把、培養板和培養皿若干；

4. 培養液：為含15%胎牛血清的DMEM培養液；

實驗方法：

1. 取材

① 摘取動物或人的供體眼球，作常規消毒處理；

② 用刀片沿角鞏膜緣環形剪開眼球，除去角膜和虹膜，并用角膜剪刀剪斷晶狀體懸韌帶，取出晶狀體，置于培養皿中；

③ 用PBS液洗去黏附在晶狀體表面的虹膜色素及玻璃體。棄去洗液；

④ 將晶狀體的凸面向下，用4號針頭于晶狀體赤道部稍靠后的部位環刺一圈，然后用兩把無齒顯微鑷子輕輕分離出晶狀體前囊膜；

2. 原代培養；

① 取下晶狀體前囊膜后，一般不經洗滌。將其剪成余額1.5mm×1.5mm的植塊；

② 用無齒顯微鑷子挑起植塊，平貼于培養板中；

③ 置于37℃恒溫箱中約5min，待組織塊稍干后便可加入培養液；

④ 按常規方法培養。每周換培養液2次，每次更換2/3的培養液量；

3. 傳代培養：

在培養細胞基本融合形成單層時即需傳代。否則細胞會因生存空間不足或由于細胞密度過大而致營養不足。按常規方法進行傳代培養；

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