常規組織初代消化培養

1、準備：取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75% 酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用 Hanks 液漂洗 2~3 次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青鏈霉素的混合液中 30~60 分鐘。

4、剪切：用眼科剪把組織切成 2~3 毫米大小的塊，以便于消化。加入比組織塊總量多 30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角燒瓶中，結扎瓶口或塞以膠塞。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于 37 ℃溫箱消化均可，消化中每隔 20 分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（ 500~1000 轉/分）離心消化液 5 分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養液。

7、計數：用計數板計數，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養液調整后，分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說， pH 要求在 7.2~7.4 范圍，培養液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用 NaHCO3 調整。

8、培養：置于 36.5 ℃溫箱培養，如用 CO2 溫箱培養，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。

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