動脈粥樣硬化患者VSMC的提取

實驗材料：

眼科剪刀1把 眼科鑷子2把 1×PBS約200ml M199培養液 離心機 5ml小皿 10ml大皿

實驗步驟：

1、在超凈臺內用10ml的離心管分裝5ml的1×PBS（已高壓滅菌）。

2、手術臺上取患者發生動脈粥樣硬化改變的病變動脈，分放入準備好的PBS中，拿回實驗室在超凈臺中，無菌條件下剝去外膜，用手術刀片刮去內膜，留下中膜并將其剪成1×1mm大小組織塊。

3、消化法：PBS清洗組織塊后并將其轉移入10ml的離心管，加入0.125％胰酶消化37℃30分鐘，室溫吹打100分鐘或者振蕩器振蕩100分鐘，待組織塊變小且消化液變粘時，收集消化液配平以1500轉/分鐘離心10分鐘后，收集細胞種植于預先加入M199培養液的5ml小皿中放入37度5％CO2的培養箱中。

4、貼塊法：PBS清洗組織塊后移入已準備好的10ml大皿中，塊間距為0.5cm，放入37度5％CO2的培養箱中，3小時后，待組織塊貼壁后，再加入2ml培養液后放回37度5％CO2的培養箱中。

注意：最后加入2ml培養液時應使其順無組織塊的皿邊緣緩慢流下，勿使組織塊吹下。

5、隨后每3天予以半量換液。

6、一周后可見組織塊周圍有細胞爬出，大約3周后80％融合。

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