大規模培養常用方法

根據動物細胞的類型，可采用貼壁培養、懸浮培養和固定化培養等三種培養方法進行大規模培養。 

一、動物細胞生長特性及培養溫度 
      1.細胞生長緩慢，易污染，培養需用抗生素 
      2.細胞大，無細胞壁，機械強度低，環境適應性差 
      3.需氧少，不耐受強力通風與攪拌 
      4.群體生長效應，貼壁生長（錨地依賴性） 
      5.培養過程產品分布細胞內外，成本高 
      6.原代培養細胞一般繁殖50代即退化死亡 

依據在體外培養時對生長基質依賴性差異，動物細胞可分為兩類：
      貼壁依賴型細胞：需要附著于帶適量電荷的固體或半固體表面才能生長，大多數動物細胞，包括非淋巴組織細胞和許多異倍體細胞均屬于這一類。 
      非貼壁依賴型細胞：無需附著于固相表面即可生長，包括血液、淋巴組織細胞、許多腫瘤細胞及某些轉化細胞。 

培養細胞的最適溫度相當于各種細胞或組織取材機體的正常溫度。人和哺乳動物細胞培養的最適溫度為35~37℃。偏離這一溫度，細胞正常的代謝和生長將會受到影響，甚至死亡。總的來說，培養細胞對低溫的耐力比高溫高。溫度不超過39℃時，細胞代謝強度與溫度成正比；細胞培養置于39~40℃環境中1h，即受到一定損傷，但仍能恢復；當溫度達43℃以上時，許多細胞將死亡。當溫度下降到30~20℃時，細胞代謝降低，因而與培養基之間物質交換減少。首先看到的是細胞形態學的改變以及細胞從基質上脫落下來。當培養物恢復到初始的培養溫度時，它們原有的形態和代謝也隨之恢復到原有水平。 

二、貼壁培養（attachment culture）是指細胞貼附在一定的固相表面進行的培養。 

1.生長特性：貼壁依賴型細胞在培養時要貼附于培養（瓶）器皿壁上，細胞一經貼壁就迅速鋪展，然后開始有絲分裂，并很快進入對數生長期。一般數天后就鋪滿培養表面，并形成致密的細胞單層。 

2.貼壁培養的優點： 
      容易更換培養液；細胞緊密黏附于固相表面，可直接傾去舊培養液，清洗后直接加入新培養液。 
      容易采用灌注培養，從而達到提高細胞密度的目的；因細胞固定表面，不需過濾系統。 
      當細胞貼壁于生長基質時，很多細胞將更有效的表達一種產品。 
      同一設備可采用不同的培養液/細胞的比例。 
      適用于所有類型細胞。 

3.貼壁培養的缺點：與懸浮培養法相比 
      擴大培養比較困難，投資大； 
      占地面積大； 
      不能有效監測細胞的生長； 

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