組織塊無血清條件培養小鼠的顱神經嵴細胞

將小鼠顱段神經管組織塊（第6體節前）經0.75mg/ml膠原酶（152U/mg）換液消化3次，37℃20分鐘孵育后，輕吹打獲神經管，膠原酶通過冷培養基反復置換。

將神經管組織塊置于經Fn預孵的75MM培養瓶中（0.25mg/ml纖粘連蛋白抽干后，以條件培養基洗滌備用），37℃培養30分鐘后組織塊貼壁，加DMEM/F12無血清條件培養基。48小時后去除組織塊。2.5g／L胰蛋白酶常規消化傳代。

無血清條件培養基的配方：在DMEM／F12無血清培養基中加入ITS (100mg／m1轉鐵蛋白、5mg／m1胰島素、30nmoL/L亞硒酸)、孕酮(20nmoL/L)、腐胺(16mg／m1)、地塞米松(39pg／ml)、油酸甘油酯(10ng／m1)、牛血清白蛋白(1mg／ml)、生物素(1mg／mI)、甘油(3.6mg／m1)、表皮生長因子(100ng／m1)、成纖維細胞生長因子(0.4ng／m1)

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