脂類染色法
脂肪和類脂(磷脂、糖脂、固醇脂等)統稱為脂類。它是構成人體組織的正常成分,不溶于水而易溶于酒精、乙醚、氯仿等脂溶劑中。在化學組成上,脂類屬于脂肪酸的酯或與這些酯有關的物質。脂類的主要功能是氧化供能。
脂肪主要存積于脂肪組織中,并以油滴狀的微粒存在脂肪細胞漿內。
在病理檢驗中,脂類染色法最常用以證明脂肪變性,脂肪栓子以及腫瘤的鑒別。脂類染色使用最廣泛的染料是蘇丹染料,最常用的有蘇丹Ⅲ,蘇丹Ⅳ,蘇丹黑及油紅O等。脂肪被染色,實際上是蘇丹染料被脂肪溶解吸附而呈現染料的顏色。經研究認為組織中脂質在液態或半液態時,對蘇丹染料著色效果最好。根據這一原理,適當提高溫度(37℃-60℃)對組織切片染色效果是有好處的。
脂類染色,用冰凍或石蠟切片,以水溶性封固劑封固,如甘油明膠和阿拉伯糖膠等。
一、蘇丹Ⅲ(Sudan Ⅲ)染色法:
操作方法:
(1) 固定于10%甲醛的組織。
(2) 水洗后采用冰凍或石蠟切片。
(3) 經蒸餾水后,浸染于Harris蘇木素 或明礬蘇木素中淡染1-2分鐘。
(4) 自來水沖洗。
(5) 水洗后,移入70%酒精5秒鐘。
(6) 投入蘇丹Ⅲ染液中約30分鐘或更長時間,置于56℃溫箱中。
(7) 在70%酒精中洗滌5-10秒鐘。
(8) 洗于蒸餾水中,然后將切片移于載玻片上。
(9) 切片移于玻片上,將切片周圍的水分小心擦掉。
(10) 甘油明膠封固。
結果:脂肪呈橙紅色或鮮紅色或黑色,膽脂素呈淡紅色,脂肪酸不著色,細胞核呈藍色。
試劑配制:
1、蘇丹Ⅲ染液配法:將0.15克蘇丹Ⅲ溶解于100ml70%酒精或純丙酮和70%酒精混合液中(各50ml),臨用時過濾,所得濾液即為飽和濃度。
注:浸染時,容器必須蓋好,否則酒精或丙酮揮發,染料沉淀。
2、甘油明膠配制:
明膠 40g
蒸餾水 210ml
甘油 250ml
石碳酸結晶 5ml
先將明膠浸入蒸餾水中2小時或更長時間,然后加甘油和石碳酸,加熱15分鐘,搖攪直至混合液均勻為止。
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