蛋白質(zhì)呈色反應(yīng)—雙縮脲反應(yīng)實(shí)驗(yàn)
【實(shí)驗(yàn)原理】
當(dāng)尿素經(jīng)加熱至180℃左右時(shí)，兩分子尿素脫去一分子氨，
進(jìn)而縮合成一分子雙縮脲。
其在堿性條件下雙縮脲與銅離子結(jié)合成紅紫色絡(luò)合物，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)。
多肽及蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中均含有許多肽鍵，其結(jié)構(gòu)與雙縮脲分子中的亞酰胺鍵相同。
因此，在堿性條件下與銅離子也能呈現(xiàn)出類似于雙縮脲的呈色反應(yīng)。
【 試劑 】
1. 蛋白質(zhì)溶液（雞蛋清用蒸餾水稀釋10倍，通過2-3層沙布濾去不容物）
2.0.1%甘氨酸溶液
3. 0.01%精氨酸溶液
4. 10%NaOH溶液
5. 1%CuSO4 溶液
6.尿素結(jié)晶
【實(shí)驗(yàn)操作】
1. 雙縮脲的制備
取少許尿素結(jié)晶 (約火柴頭大小)放入干燥的試管中，微火加熱至尿素熔解至硬化，剛硬化時(shí)立即停止加熱，此時(shí)雙縮脲即已形成。冷卻后加10%氫氧化鈉溶液約1ml、并震蕩，再加入1%硫酸銅溶液2滴，再震蕩，觀察顏色的變化。
注意：
a.在操作過程中試管不能沖向其他人以防止?fàn)C傷；
b.控制加熱的時(shí)間既不能過長(zhǎng)也不能過短；
c.加熱時(shí)火不能太大，防止碳化。
2. 觀察現(xiàn)象
另外取試管4支，按照下表加入各種 試劑 ，觀察并解釋現(xiàn)象。
試劑 | 管號(hào) | |||
1 | 2 | 3 | 4 | |
蛋白質(zhì)樣液（ml） | 1.0 | |||
0.01%精氨酸（ml） | 1.0 | |||
0.1%甘氨酸（ml） | 1.0 | |||
10%NaOH（ml） | 2.0 | 2.0 | 2.0 | 2.0 |
蒸餾 水（ml） | 1.0 | |||
現(xiàn)象 | ||||
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