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核酸的紫外吸收
發布日期:2022-06-22 09:11:21


核酸的紫外吸收


嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵,使堿基、核苷、核苷酸和核酸在 240~290nm 的紫外波段有一強烈的吸收峰,因此核酸具有紫外吸收特性。

 DNA 鈉鹽的紫外吸收在 260nm 附近有最大吸收值 ,其吸光率( absorbance )以 A260 表示, A260 是核酸的重要性質,在核酸的研究中很有用處。

 230nm 處為吸收低谷, RNA 鈉鹽的吸收曲線與 DNA 無明顯區別。不同核苷酸有不同的吸收特性。

所以可以用紫外分光光度計加以定量及定性測定。


實驗室中最常用的是定量測定小量的 DNA  RNA 

對待測樣品是否純品可用紫外分光光度計讀出 260nm  280nm  OD 值,因為蛋白質的最大吸收在 280nm 處,因此從 A260 /A280 的比值即可判斷樣品的純度。

 DNA  A260 /A280 應為 1.8 ,純 RNA 應為 2.0 

樣品中如含有雜蛋白及苯酚, A260 /A280 比值即明顯降低。

不純的樣品不能用紫外吸收法作定量測定。

對于純的核酸溶液,測定 A260 ,即可利用核酸的比吸光系數計算溶液中核酸的量,核酸的比吸光系數是指濃度為 1 μ g  mL 的核酸水溶液在 260nm 處的吸光率,天然狀態的雙鏈 DNA 的比吸光系數為 0.020 ,變性 DNA  RNA 的比吸光系數為 0.022 

通常以 1OD 值相當于 50 μ g  mL 雙螺旋 DNA ,或 40 μ g  mL 單螺旋 DNA (或 RNA ),或 20 μ g  mL 寡核苷酸計算。

這個方法既快速,又相當準確,而且不會浪費樣品。

對于不純的核酸可以用瓊脂糖凝膠電泳分離出區帶后,經啡啶溴紅染色而粗略地估計其含量。





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