薄層層析中顯色劑的選擇與配制
顯色試劑 顯色劑可以分成兩大類：一類是檢查一般有機化合物的通用顯色劑;
另一類是根據化合物分類或特殊官能團設計的專屬性顯色劑。顯色劑種類繁多，列舉一些常用的顯色劑。
l.通用顯色劑
①硫酸常用的有四種溶液：硫酸-水(1：1)溶液;硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液;1.5mol/L硫酸溶液與0.5-1.5mol/L硫酸銨溶液，噴后110oC烤15min，不同有機化合物顯不同顏色。
②0.5%碘的氯仿溶液 對很多化合物顯黃棕色。
③中性0.05%高錳酸鉀溶液 易還原性化合物在淡紅背景上顯黃色。
④堿性高錳酸鉀試劑 還原性化合物在淡紅色背景上顯黃色。 溶液I：1%高錳酸鉀溶液;溶液Ⅱ：5%碳酸鈉溶液;溶液I和溶液Ⅱ等量混合應用。
⑤酸性高錳酸鉀試劑 噴1.6%高錳酸鉀濃硫酸溶液(溶解時注意防止爆炸)，噴后薄層于180oC加熱15～20min。
⑥酸性重鉻酸鉀試劑 噴5%重鉻酸鉀濃硫酸溶液，必要時150oC烤薄層。
⑦5%磷鉬酸乙醇溶液 噴后120℃烘烤，還原性化合物顯藍色，再用氨氣薰，則背景變為無色。
⑧鐵氰化鉀-三氯化鐵試劑 還原性物質顯藍色，再噴2mol/L鹽酸溶液，則藍色加深。 溶液I：1%鐵氰化鉀溶液;溶液Ⅱ：2%三氯化鐵溶液;臨用前將溶液I和溶液Ⅱ等量混合。
2.專屬性顯色劑 由于化合物種 類繁多，因此專屬性顯色劑也是很多的，現將在各類化合物中最常用的顯色劑列舉如下：
(1) 烴類
①硝酸銀/過氧化氫 檢出物：鹵代烴類。 溶液：硝酸銀O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀釋至200ml，再加30%過氧化氫1滴。 方法：噴后置未過濾的紫外光下照射; 結果：斑點呈暗黑色。
②熒光素/溴 檢出物：不飽和烴。 溶液：I.熒光素0.1g溶于乙醇lOOml;Ⅱ.5%溴的四氯化碳溶液。 方法：先噴(I)，然后置含溴蒸氣容器內，熒光素轉變為四溴熒光素(曙紅)，熒光消失，不飽和烴斑點由于溴的加成，阻止生成曙紅而保留熒光，多數不飽和烴在粉紅色背景上呈黃色。
③四氯鄰苯二甲酸酐 檢出物：芳香烴。 溶液：2%四氯鄰苯二甲酸酐的丙酮與氯代苯(10：1)的溶液。
方法：噴后置紫外光下觀察。
④甲醛/硫酸 檢出物：多環芳烴。 溶液：37%甲醛溶液O.2ml溶于濃硫酸l0ml。
(2)醇類
①3，5一二硝基苯酰氯 檢出物：醇類。 溶液：I.2%本品甲苯溶液;Ⅱ.0.5%氫氧化鈉溶液;Ⅲ.O.002%羅丹明溶液。
方法：先噴(I)，在空氣中干燥過夜，用蒸氣薰2min，將紙或薄層通過試液(Ⅱ)30s，噴水洗，趁濕通過(Ⅲ)15s，空氣干燥，紫外燈下觀察。
②硝酸鈰銨 檢出物：醇類。 溶液：I.1%硝酸鈰銨的0.2mol/L硝酸溶液;Ⅱ.N,N-二甲基-對苯二胺鹽酸鹽1.5g溶于甲醇、水與乙酸(128m1+25m1+1.5m1)混合液中，用前將(I)與(Ⅱ)等量混合。噴板后于105oC加熱5min。
③香草醛/硫酸 檢出物：高級醇、酚、甾類及精油。 溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。 方法：噴后于120oC加熱至呈色最深。
④二苯基苦基偕肼 ’ 檢出物：醇類、萜烯、羰基、酯與醚類。 溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。 方法：噴后于110oC加熱5～lOmin。 結果：紫色背景呈黃色斑點。
(3)醛酮類
品紅/亞硫酸 檢出物：醛基化合物。 溶液：I.0.01%品紅溶液，通入二氧化硫直至無色;Ⅱ.0.05mol/L氯化汞溶液; Ⅲ.O.05mol/L硫酸溶液。 方法：將I、Ⅱ、Ⅲ以1：1：10混合，用水稀釋至l00ml。
鄰聯茴香胺 檢出物：醛類、酮類。 溶液：本品乙酸飽和溶液。
2，4-二硝基苯肼 檢出物：醛基、酮基及酮糖。 溶液：I.0.4%本品的2mol/L鹽酸溶液; Ⅱ.本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加濃鹽酸lml。 方法：噴溶液I或Ⅱ后，立即噴鐵氰化鉀的2mol/L鹽酸溶液。
結果：飽和酮立即呈藍色;飽和醛反應慢，呈橄欖綠色;不飽和羰基化合物不顯色。
繞丹寧 檢出物：類胡蘿卜素醛類。 溶液：I.1%～5%繞丹寧乙醇溶液;Ⅱ.25%氫氧化銨或27%氫氧化鈉溶液。
方法：先噴溶液I，再噴溶液Ⅱ，干燥。
(4)有機酸類
1 溴甲酚綠 檢出物：有機酸類。 溶液：溴甲酚綠0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氫氧化鈉溶液5ml。 方法：浸板。 結果：藍色背景產生黃色斑點。
2 高錳酸鉀/硫酸 檢出物：脂肪酸衍生物。 溶液：見通用顯色劑酸性高錳酸鉀。
3 過氧化氫 檢出物：芳香酸。 溶液：0.3%過氧化氫溶液。 方法：噴后置紫外光(365nm)下觀察。 結果：呈強藍色熒光。
4 2，5 6-二氯苯酚-靛酚鈉 檢出物：有機酸與酮酸。 溶液：0.1%本品的乙醇溶液。 方法：噴后微溫。 結果：藍色背景呈紅色。
(5)酚類
1 Emerson 試劑(4-氨基安替比林/鐵氰化鉀(Ⅲ)) 檢出物：酚類、芳香胺類及揮發油。
溶液：I.4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml;Ⅱ.鐵氰化鉀(Ⅲ)4g溶于水50ml，
2 用乙醇稀釋至100ml。 方法：先噴溶液I，
3 在熱空氣中干燥5min，
4 再噴溶液Ⅱ，
5 再于熱空氣中干燥5min，
6 然后將板置含有氨蒸氣(25%氨溶液)的密閉容器中。
結果：斑點呈橙-淡紅色。揮發油在亮黃色背景下呈紅色斑點。
7 Boute 反應 檢出物：酚類、氯、溴、烷基代酚。 方法：將薄層置有NO2蒸氣(含濃硝酸)的容器中3～10min，
8 再用NH2蒸氣(濃氨液)處理。
9 氯醌(四氯代對苯醌) 檢出物：酚類。 溶液：1%本品的甲苯溶液。
10 DDQ(二氯二氰基苯醌)試劑 檢出物：酚類。 溶液：2%本品的甲苯溶液。
11 TCNE (四氰基乙烯)試劑 檢出物：酚類、芳香碳氫化物、雜環類、芳香胺類。 溶液：0.5%～1%本品的甲苯溶液。
12 Gibb’s(2，13 6-二溴苯醌氯亞胺)試劑 檢出物：酚類。 溶液：2%本品的甲醇溶液。 ⑦氯化鐵 檢出物：酚類、羥酰胺酸。 溶液：1%～5%氯化鐵的0.5mol/L鹽酸溶液。 結果：酚類呈藍色、羥酰胺酸呈紅色。
(6)含氮化合物
①FCNP(硝普鈉/鐵氰化物)試劑 檢出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲與硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。 溶液：10%氫氧化鈉溶液、10%硝普鈉溶液、10%鐵氰化鉀溶液與水按1：1：1：3混合，在室溫至少放置20min，冰箱保存數周，用前將混合液與丙酮等體積混合。
②Dragendorff(碘化鉍鉀試劑)試劑 檢出物：芳香族含氮化合物，如生物堿類、抗心律不齊藥物。 溶液：I.堿式硝酸鉍0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中;Ⅱ.碘化鉀8g溶于水20ml中。 將上述溶液I及Ⅱ等量混合，置棕色瓶中作為儲備液，用前取儲備液lml、冰醋酸2ml與水l0ml混合。 結果：呈橘紅色斑點。
4-甲基傘形酮 檢出物：含氮雜環化合物。 溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。 方法：噴板后置25%氨水蒸氣的容器中,取出后于紫外燈(365nm)下觀察。
碘鉑酸鉀 檢出物：生物堿類及有機含氮化物。 溶液：10%六氯鉑酸溶液3ml與水97ml混合，加6%碘化鉀溶液，混勻。臨用前配制。
硫酸高鈰銨/硫酸 檢出物：生物堿及含碘有機化物。 溶液：硫酸鈰1g混懸于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入濃硫酸直至混濁消失。 方法：噴后薄層于110℃加熱數分鐘。
結果：阿樸嗎啡、馬錢子堿、秋水仙堿、罌粟堿、毒扁豆堿與有機碘化物均能檢出⑥Ehrlich (對二甲氨基苯甲醛/鹽酸)試劑 檢出物：吲哚衍生物及胺類。 溶液：1%本品的濃鹽酸溶液與甲醇1：1混合。
方法：噴后板于50℃加熱20min。 結果：呈不同顏色的斑點。
(7)胺類
①硝酸/乙醇 檢出物：脂肪族胺類。 溶液：50滴65%硝酸于乙醇100ml中。 方法：需要時120oC加熱。
②2，6-二氯醌氯亞胺 檢出物：抗氧劑、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氫化物、藥物、苯氧基乙酸除草劑等。 溶液：新鮮制備的0.5%～2%本品乙醇溶液。 方法：噴后薄層于110oC加熱10min，再用氨蒸氣處理。
③茜素 檢出物：胺類。 溶液：O.1%本品的乙醇溶液。
④丁二酮單肟/氯化鎳 檢出物：胺類。 溶液：I.丁二酮單肟1.2g溶于熱水35ml中，加氯化鎳0.95g，冷卻后加濃氨水2ml; Ⅱ.鹽酸羥胺0.12g溶于200ml水中。 方法：將溶液I及Ⅱ混合，放置1天，過濾。
(5)Pauly (對氨基苯磺酸)試劑 檢出物：酚類、胺類和能偶合的雜環化合物。 溶液：磺酸4.5g溶于溫熱的12mol/L鹽酸45ml中，用水稀釋至500ml，取lOml于冰中冷卻，加4.5%亞硝酸鈉冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等體積10%碳酸鈉溶液。
硫氰酸鈷(Ⅱ). 檢出物：生物堿、伯、仲、叔胺類。 溶液：硫氰酸銨3g與氯化鈷1g溶于水20ml。 結果：白色至粉紅色背景上呈藍色斑點，2h后顏色消退。若將薄層噴水或放入飽和水蒸氣容器內，可重現色點。
1，2-萘醌-4-磺酸鈉 檢出物：芳香胺類。 溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，濾去不溶物即得。 方法：噴后反應30min顯色。
葡萄糖/磷酸 檢出物：芳香胺類。 溶液：葡萄糖2g溶于85%磷酸l0ml與水40ml混合液中，再加乙醇與正丁醇各30ml。 方法：噴后于115℃加熱l0min。
(8)硝基及亞硝基化合物
①α-萘胺 檢出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。 溶液：I.O.5%α-萘胺乙醇溶液; Ⅱ.10%氫氧化鉀甲醇溶液。 方法：先噴溶液I，再噴溶液Ⅱ。 結果：呈紅褐色斑點。
②二苯胺/氯化鈀 檢出物：亞硝胺類。 溶液：1.5%二苯胺乙醇溶液與0.1g氯化鈀的0.2%氯化鈉溶液lOOml，按5：1混合。 方法: 噴后置紫外光(254nm)下觀察。 結果：顯紫色斑點。
(9)氨基酸及肽類
①茚三酮 檢出物：氨基酸、胺與氨基糖類。 溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。 方法：噴后于110oC加熱。 結果：呈紅紫色斑點。
②茚三酮/乙酸鎘 檢出物：氨基酸及雜環胺類。 溶液：茚三酮1g及乙酸鎘2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀釋至500ml。 方法：噴后于120oC加熱20min。
③1，2-萘醌-4-磺酸鈉 檢出物：氨基酸。 溶液：臨用前將本品O.02g溶于5%碳酸鈉l00ml中。 方法：噴后室溫干燥。 結果：不同氨基酸呈不同色點。
④靛紅/乙酸鋅 檢出物：氨基酸與某些肽類。 溶液：靛紅1g與乙酸鋅1g溶于95%異丙醇l00ml中，加熱至80oC，冷卻后加乙酸1ml，冰箱保存。 方法：噴后于80～85"C加熱30min。
⑤茚三酮/冰醋酸 檢出物：二肽及三肽。 溶液：1%茚三酮吡啶溶液與冰醋酸按5：1混合。 方法：噴后于l00oC加熱5min。
⑥香草醛 檢出物：氨基酸及胺類。 溶液：I.本品1g溶于丙醇50ml中; Ⅱ.1mol/L氫氧化鉀溶液lml，用乙醇稀釋至lOOml。 方法：先噴溶液I后于110oC干燥l0min，再噴溶液Ⅱ，于110oC再干燥l0min，于紫外光(365nm)下觀察。
(10)甾類
①香草醛/硫酸 檢出物：甾體激素。 溶液：1%香草醛濃硫酸溶液。 方法：噴后于105℃加熱5min。
②氯化錳 檢出物：雌激素類。 溶液：氯化錳0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。 方法：噴后置紫外光(365nm)下觀察。
③高氯酸 檢出物：甾體激素。 溶液：5%高氯酸甲醇溶液。 方法：噴后于110oC加熱5min，置紫外光(365nm)下觀察。
④三氯化銻/乙酸 檢出物：甾類與二萜類。 溶液：三氯化銻20g溶于乙酸20ml與氯仿60ml混合液中。 方法：噴后于100oC加熱5min，紫外光長波下觀察。 結果：二萜類斑點呈紅黃-藍紫色。
⑤對甲苯磺酸 檢出物：甾族化合物、黃酮類與兒茶酸類。 溶液：20%本品的氯仿溶液。 方法：噴后于100oC加熱數分鐘，紫外光長波下觀察。 結果：斑點呈熒光。
⑥氯磺酸/乙酸 檢出物：三萜、甾醇與甾族化合物。 溶液：氯磺酸5ml在冷卻下加乙酸l0ml溶解。 方法：噴后于130℃加熱5～l0min，置紫外光長波下觀察。 結果;斑點顯熒光。
(11)糖類
①茴香胺、鄰苯二酸試劑 檢出物：碳氫化合物。 溶液：1.23g茴香胺及1.66g鄰苯二酸于l00ml 95%乙醇中的溶液。 方法：噴霧或浸漬。 結果：己糖呈綠色、甲基戊糖呈黃綠色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。
②四乙酸鉛/2，7一二氯熒光素 檢出物：甙類、酚類、糖酸類 溶液：I.2%四乙酸鉛的冰醋酸溶液;Ⅱ.1%2，7一二氯熒光素乙醇溶液。 取溶液I、Ⅱ 各5ml混勻，用干燥的苯或甲苯稀釋至200ml，試劑溶液只能穩定2h。 方法：浸板。
③鄰氨基聯苯/磷酸 檢出物：糖類。 溶液：O.3g鄰氨基聯苯加85%磷酸5ml與乙醇95ml。 方法：噴板后llOoC加熱15～20min。 結果：斑點呈褐色。
④苯胺/二苯胺/磷酸 檢出物：還原糖。 溶液：4g二苯胺、4ml苯胺與20ml 85%磷酸共溶于200ml丙酮中。 方法：噴后于85℃加熱l0min。 結果：產生各種顏色。1，4-己醛糖、低聚糖呈藍色。
⑤雙甲酮/磷酸 檢出物：酮糖。 溶液：雙甲酮(5，5-二甲基環己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇與l0ml 85%磷酸中。 方法：噴板后于110oC加熱15～20min。 結果：日光下觀察，白色背景上呈黃色斑點，紫外光長波下呈藍色熒光。
⑥聯苯胺/三氯乙酸 檢出物：糖類。 溶液：0.5g聯苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40%三氯乙酸水溶液，用乙醇稀釋至l00ml。 方法：噴后置紫外光下照射15min。 結果：斑點呈灰棕-紅褐色。
⑦對二甲氨基苯甲醛/乙酰丙酮 檢出物：氨基糖類。 溶液：I. 5ml 50%氫氧化鉀溶液與20ml乙醇混勻，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml與正丁醇50ml的混合液l0ml，此兩種溶液均需新鮮配制，臨用前混合; Ⅱ. 1g對二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml濃鹽酸，需要時此溶液可用正丁醇180ml稀釋。 方法：先噴I后于105oC加熱5min，再噴Ⅱ，然后于90℃干燥5min。 結果：斑點呈紅
北京天優福康生物科技有限公司
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
