常用貯存液的配制之X-gal溶液的配制
【配制方法】
X-gal為5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖苷。用二基甲酰胺溶解X-gal配制成的20mg/ml的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中，裝有X-gal溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞，并應貯存于-20℃。X-gal溶液無須過濾除菌。
雜交試驗中用于降低背景的封閉劑
試劑
用途
Denhardt試劑 Northern雜交
使用RNA探針的雜交
單拷貝序列的Southern雜交
將DNA固定于尼龍膜上的雜交
Denhardt試劑通常配制50×貯存液，過濾后保存于-20℃。可將該貯存液10倍稀釋于預雜交液（常為含有0.5%SDS和100μg/ml經變性被打斷的鮭精DNA的6×SSC或6×SSPE）中。50×Denhardt液中含5g聚蔗糖（Ficoll,400型，Pharmacia）、5g聚乙烯吡咯烷酮和5g牛血清白蛋白（組分V”Sigmal），加水至終體積為500ml。
BLOTTOGrunstein-Hogness雜交
Benton-Davis雜交
除單拷貝序列Southern雜交以外的所有Southern雜交
斑點印跡
1×BLOTT（牛乳轉移技術優化液，Bovine Lacto Transfer Technique Optimizer）,是含5%膠脂奶粉和0.02%疊氮鈉的水溶液，應保存于4℃。使用前可用預雜交液稀釋25倍。BLOTTO不應與高濃度的SDS并用，因為后者會導致牛奶中蛋白質析出。如果雜交背景不合要求，可在雜交液中加入NP-40至終濃度為1%。BLOTTO不能用作Northern雜交的封閉劑，因為這一封閉劑中可能含有RNA酶，其活性之高使人無法接受。
注意：疊氮鈉有毒性，取用時需戴手套小心操作。含疊氮鈉的溶液應予明確標記。
肝素 Southern雜交
原位雜交
肝素（Sigma H-7005，從豬中提取的二級產品或相當等級的產品）用4×SSPE或4×SSC溶解配制成50mg/ml的濃度，保存于4℃。肝素在含有葡聚糖硫酸酯的雜交液中用作封閉劑的濃度為500μg/ml，在不含葡聚糖硫酸酯的雜交液中的濃度為50μg/ml。
經變性并被打斷的鮭精DNA southern和Northern雜交
把鮭魚精子DNA（Sigma,Ⅲ,鹽鈉）溶解于水配制成10mg/ml的濃度，必要時于室溫磁力攪拌2～4h助溶。把溶液中NaCl的濃度調至0.1mol/L，并用酚和酚/氯仿各抽提一次，回收水相。合DNA溶液快速通17號皮下注射針頭12次，以剪切DNA。加入2倍體積用冰預冷的乙醇沉淀DNA。離心回收DNA并重溶于水，配制成10mg/ml的濃度，測定溶液的OD260值并計算出精確的DNA濃度，然后煮沸10min，分裝成小份保存于-20℃。使用前置沸水浴中加熱5min，然后迅速在冰浴中驟冷。預雜交液中應含有100μg/ml經變性并被打斷的鮭魚精子DNA
北京天優福康生物科技有限公司
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
