Northern印跡雜交
Northern印跡雜交是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法。
DNA印跡技術由Southern于1975年創建，稱為Southern印跡技術。RNA印跡技術正好與DNA相對應，故被趣稱為Northern印跡雜交，與此原理相似的蛋白質印跡技術則被稱為western blot。
Northern印跡雜交的RNA吸印與Southern印跡雜交的DNA吸印方法類似，只是在進樣前用甲基氧化汞、乙二醛或甲醛使RNA變性，而不用NaOH，因為它會水解RNA的2’-羥基基團。
RNA變性后有利于在轉印過程中與硝酸纖維素膜結合，它同樣可在高鹽中進行轉印，但在烘烤前與膜結合得并不牢固，所以在轉印后不能用低鹽緩沖液洗膜，否則RNA會被洗脫。
在膠中不能加EB，因它為影響RNA與硝酸纖維素膜的結合，為測定片段大小，可在同一塊膠上加標記物一同電泳，之后將標記物膠切下，上色、照像。樣品膠則進行Northern轉印，標記物膠上色的方法是在暗室中將其浸在含5μg/ml EB的0.1mol/L 醋酸銨中10min，在水中就可脫色。
在紫外光下用一次成像相機拍照時，上色的RNA膠要盡可能少接觸紫外光，若接觸太多或白熾燈下暴露過久，會使RNA信號降低。
從瓊脂糖凝膠中分離功能完整的mR－NA時，甲基氫氧化汞是一種強力、可逆變性劑，但是有毒，因而許多人喜用甲醛作為變性劑。所有操作均應避免RNase的污染。
下面介紹RNA甲醛凝膠電泳和吸印方法：
（1）試劑
10×MSE緩沖液：0.2mol/L 嗎啉代丙烷磺酸（MOPS），pH7.0, 50mmol/L 醋酸鈉，1mmol/l EDTA, pH8.0。
5×樣品緩沖液：50%甘油，1mmol/l EDTA, 0.4%溴酚藍。
甲醛：用水配成37%濃度（12.3mol/L）。應在通風柜中操作，pH高于4.0
去離子甲酰胺。
50mmol/L NaOH(含10mmol/l NaCl)。
0.1mol/L Tris·HCl,Ph7.5。
（2）步驟
①40ml水中加7g瓊脂糖，煮沸溶解，冷卻到60℃，加7ml 10×MSE緩沖液、11.5ml甲醛，加水定容 至70ml，混勻后 倒入盛膠槽。
②等膠凝固后，去掉梳子和膠布，將盛膠槽放入1×MSE緩沖液的電泳槽。
③使RNA變性（最多20μg）：RNa 4.5μl，10×MSE緩沖液2.0μl，甲醛3.5μl，去離子甲酰胺10.0μl。
④55℃加熱15min，冰浴冷卻。
⑤加2μl 5×載樣緩沖液。
⑥上樣，同時加RNA標記物。
⑦60伏電泳過夜。
⑧取出凝膠，水中浸泡2次，每次5min。
⑨室溫下將膠浸到50mmol/L NaOH和10mmol/l NaCl中45min，水解高分子RNA，以增強轉印。
⑩室溫下將膠浸到0.1mol/L Tris·HCl (Ph7.5)中45min，使膠中和。
⑾20×SSC洗膠1h。
⑿20×SSC中過夜，轉印到硝酸纖維素膜上。
⒀取出硝酸纖維膜，80℃真空烘烤2h。
北京天優福康生物科技有限公司
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
