維生素A的測(cè)定:比色法
實(shí)驗(yàn)原理
維生素A（視黃醇）屬于脂溶性維生素，在氯仿溶液中能與三氯化銻生成不穩(wěn)定的藍(lán)色物質(zhì)，此反應(yīng)稱(chēng)為Carr-price反應(yīng)，可用于維生素A 的定性鑒定和定量測(cè)定，所生成的顏色的深淺與溶液中維生素A的量成正比。在一定時(shí)間內(nèi)可用分光光度計(jì) 在620nm波長(zhǎng)下測(cè)定其吸光度。
試劑和器材
一、試劑
無(wú)水硫酸鈉；醋酸酐；無(wú)水氯仿；乙醚。
25％三氯化銻－氯仿溶液：稱(chēng)取干燥的三氯化銻25g溶于100mL無(wú)數(shù)氯仿中，棕色瓶避光儲(chǔ)存。
維生素A標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱(chēng)取標(biāo)準(zhǔn)維生素A，置于容量瓶中，用氯仿溶解，配成100IU/mL 的標(biāo)準(zhǔn)液。
二、材料
魚(yú)肝油。
三、器材
試管1.5×15cm（×10）;移液管10mL（×1）, 1 mL（×11）；容量瓶25mL（×10），帶塞錐形瓶250mL（×1），研缽，分光光度計(jì)。
操作方法
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
將維生素A標(biāo)準(zhǔn)液用氯仿稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)系列（如10，20，30，40，50，60，70，80，90，100IU/mL）。再取相同數(shù)量比色杯，順次加入1mL氯仿和1mL標(biāo)準(zhǔn)液，各管加入醋酸酐一滴，制成標(biāo)準(zhǔn)比色列。
用氯仿于620nm波長(zhǎng)處調(diào)零。將標(biāo)準(zhǔn)比色列按順序移至光路前，迅速加入9mL三氯化銻－氯仿溶液，在6秒內(nèi)測(cè)光吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，以維生素含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
二、樣品測(cè)定
采用研磨法測(cè)維生素A的含量。
研磨：精確稱(chēng)取2－5g樣品，置于研缽內(nèi)，加入3－5倍樣品重量的無(wú)水硫酸鈉，仔細(xì)研磨至樣品中的水分完全被吸收。
提取：小心將上述研磨物移入帶塞的錐形瓶中，準(zhǔn)確加入50－100mL乙醚，蓋好塞子，用力振搖2分鐘，使樣品種維生素A 溶入乙醚中，將錐形瓶置于冰水中1－2h, 直至乙醚液澄清為止。
濃縮：取澄清乙醚提取液2－5mL, 放入比色管中，在70－80℃水浴中抽氣蒸干，立即加入氯仿1mL 溶解殘?jiān)偌?滴醋酸酐和9mL 三氯化銻，混勻，在6秒內(nèi)測(cè)其吸光值。
據(jù)所測(cè)吸光值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查處待測(cè)管中維生素A的國(guó)際單位數(shù)，再根據(jù)稀釋關(guān)系求出樣品中維生素A的含量。
注意事項(xiàng)
(1) 維生素A極易被光線破壞，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在微弱光線下進(jìn)行。
定量測(cè)定維生素A所用的試劑和器材必須絕對(duì)干燥。微量水分可使三氯化銻，不再與維生素A反應(yīng)，并出現(xiàn)混濁。在試管中加入1－2滴醋酸酐可除去微量吸入的水分。
(2) 氯仿應(yīng)不含分解物，否則會(huì)破壞維生素A。
北京天優(yōu)福康生物科技有限公司
官網(wǎng)：http://www.jyzjsd.com/
服務(wù)熱線：400-860-6160
聯(lián)系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
