肌糖原的酵解作用
實驗原理
在動物、植物、微生物等許多生物機體內，糖的無氧分解幾乎都按完全相同的過程進行。本實驗以動物肌肉組織中肌糖原的酵解過程為例。肌糖原的酵解作用，即肌糖原在缺氧的條件下，經過一系列的酶促反應，最后轉變成乳酸的過程。
肌肉組織中的肌糖原首先磷酸化，經過己糖磷酸酯、丙糖磷酸酯、甘油磷酸酯等一系列中間產物，最后生成乳酸。該過程可綜合成下列反應式：
肌糖原的酵解作用是糖類供給組織能量的一種方式。當機體突然需要大量的能量，而又供氧不足（如劇烈運動時），則糖原的酵解作用可暫時滿足能量消耗的需要。在有氧條件下，組織內糖原的酵解作用受到抑制，而有氧氧化則為糖代謝的主要途徑。
糖原酵解作用的實驗，一般使用肌肉糜或肌肉提取液。在用肌肉糜時，必須在無氧條件下進行；而用肌肉提取液，則可在有氧條件下進行。因為催化酵解作用的酶系統全部存在于肌肉提取液中，而催化呼吸作用（即三羧酸循環和氧化呼吸鏈）的酶系統，則集中在線粒體中。
糖原或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成來觀測。在除去蛋白質與糖以后，乳酸可以與硫酸共熱變成乙醛，后者再與對羥基聯苯反應產生紫羅蘭色物質，根據顏色的顯現而加以鑒定。
該法比較靈敏，每毫升溶液含1－5μg乳酸即給出明顯的顏色反應。若有大量糖類和蛋白質等雜質存在，則嚴重干擾測定，因此實驗中應盡量除凈這些物質。另外，測定時所用的 儀器 應嚴格地洗干凈。
試劑 和器材
一、 試劑
對羥基聯苯試劑：稱取對羥基聯苯1.5g，溶于100mL 0.5% NaOH溶液，配成1.5%的溶液。若對羥基聯苯顏色較深，應用丙酮或無水乙醇重結晶。放置時間較長后，會出現針狀結晶，應搖勻后使用。
0.5%糖原溶液（或淀粉溶液）；20%三氯乙酸溶液；氫氧化鈣（粉末）；濃硫酸；飽和硫酸銅溶液；1/15mol/L磷酸緩沖液（pH7.4）。
二、材料
兔肌肉糜。
三、器材
試管 1.5×15cm（×8）及 試管 架；移液管5mL（×2）, 2 mL（×1）, 1mL（×2）；滴管；量筒10mL（×4）；玻璃棒；恒溫 水浴 ；沸 水浴 。
操作方法
一、 制備肌肉糜
將兔殺死后，放血，立即割取背部和腿部肌肉，在低溫條件下用剪刀盡量把肌肉剪碎成肌肉糜。注意，應在臨用前制備。
二、肌肉糜的糖酵解
取4支 試管 ，編號后各加入新鮮肌肉糜0.5g。1,2號管為樣品管，3,4號管為空白管。向3，4號空白管內加入20%三氯乙酸3mL，用玻璃棒將肌肉糜充分打散，攪勻，以沉淀蛋白質和終止酶的反應。
然后分別向4支 試管 內各加入3mL磷酸 緩沖液 和1mL 0.5%糖原溶液（或0.5%淀粉溶液）。用玻璃棒充分攪勻，加少許液體石蠟隔絕空氣，并將4支試管同時放入37℃恒溫水浴中保溫。
1.5h后，取出試管，立即向1，2號管內加入20%三氯乙酸3mL，混勻。將各試管內容物分別過濾，棄去沉淀。量取每個樣品的濾液5mL，分別加入到已編號的試管中，然后向每管內加入飽和硫酸銅溶液1mL，混勻，再加入0.5g氫氧化鈣粉末，用玻璃棒充分攪勻后，放置30min，并不時攪動內容物，使糖沉淀完全。將每個樣品分別過濾，棄去沉淀。
三、乳酸的測定
取4支潔凈、干燥的試管，編號，每個試管加入濃硫酸2mL，將試管至于冷水浴中，分別用小滴管取每個樣品的濾液1滴或2滴，逐滴加入到已冷卻的上述濃硫酸溶液中（注意滴管大小盡可能一致），隨加隨搖動試管，避免試管內的溶液局部過熱。
將試管混合均勻后，放入沸水浴中煮5min，取出后冷卻，再加入對羥基聯苯試劑2滴，勿將對羥基聯苯試劑滴到試管壁上，混勻試管內容物，比較和紀錄各試管溶液的顏色深淺，并加以解釋。
注意事項
（1）對羥基聯苯試劑一定要經過純化，使其呈白色。
（2）在乳酸測定中，試管必須潔凈、干燥，防止污染，影響結果。
北京天優福康生物科技有限公司
官網：http://www.jyzjsd.com/
服務熱線：400-860-6160
聯系電話/微信：13718308763
QQ:2136615612 3317607072
E-mail：Tianyoubzwz@163.com
