總糖和還原糖的測定:3,5－二硝基水楊酸法
目的要求
掌握還原糖和總糖的測定原理，學習用比色法測定還原糖的方法。
實驗原理
在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。
在過量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長處有最大吸收，在一定的濃度范圍內，還原糖的量與光吸收值呈線性關系，利用比色法可測定樣品中的含糖量。
一、 試劑
3,5－二硝基水楊酸（DNS） 試劑 ：稱取6.5g DNS溶于少量熱蒸餾水中，溶解后移入1000mL容量瓶中，加入2mol/L氫氧化鈉溶液325mL，再加入45g丙三醇，搖勻，冷卻后定容至1000mL。
葡萄糖標準溶液：準確稱取干燥恒重的葡萄糖200mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL，即含葡萄糖為2.0mg/mL。
6mol/L HCl：取250mL濃HCl（35%～38%）用蒸餾水稀釋到500mL。
碘－碘化鉀溶液：稱取5g碘，10g碘化鉀溶于100mL蒸餾水中。
6mol/L NaOH：稱取120g NaOH溶于500mL蒸餾水中。
0.1% 酚酞指示劑。
二、材料
藕粉，淀粉。
三、器材
試管 1.5×15cm（×13）, 3.0×20cm（×1）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×5）， 10mL（×1）；水浴鍋；電爐；分光光度計。
操作方法
一、 葡萄糖標準曲線制作
取6支1. 5 cmm×1.5cm 試管 ，按下表加入2.0mg/mL葡萄糖標準液和蒸餾水。
管號 | 葡萄糖標準液（mL） | 蒸餾水(mL) | 葡萄糖含量(mg/mL) | A540 |
0 | 0 | 1 | 0 | |
1 | 0.2 | 0.8 | 0.4 | |
2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | |
3 | 0.6 | 0.4 | 1.2 | |
4 | 0.8 | 0.2 | 1.6 | |
5 | 1 | 0 | 2 |
在上述試管中分別加入DNS試劑2.0mL，于沸 水浴 中加熱2min進行顯色，取出后用流動水迅速冷卻，各加入蒸餾水9.0mL，搖勻，在540nm波長處測定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）為橫坐標，光吸收值為縱坐標，繪制標準曲線。
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