腫瘤細胞的原代培養方法

腫瘤細胞對培養基的要求不如正常細胞嚴格，一般常用RPMI、DMEM、McCoy-5A等培養基，血清濃度不高，10%即可，建議最好在原代培養時能加入生長因子或原患者血清（1%-2%）以利細胞生長。培養方法很多，主要有組織塊法、酶消化法、鉭網法、脫落細胞法等。

1.組織塊法

將取得的瘤組織去除脂肪、結締組織及壞死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎組織，切成1-2mm3小塊，接種于事先涂有鼠尾膠原的培養瓶（或皿）中，37℃、5%CO2或加蓋并塞在普通恒溫箱中培養。

2.酶消化法

在上述的碎組織塊中加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml膠原酶，在37℃水浴中消化30min或更長一些，去除消化液，用洗液洗3次，培養基洗1次后，用完全培養基懸浮，并用吸管吹打分散制成細胞懸液，計數。以（5-10）x108個/L細胞濃度，在含有10%小牛血清的RPMI、EagleMEM或DMEM中，在37℃、5%CO2下分瓶（或皿）中培養。

3.鉭網法

在一張面積約為1cm2的鉭網上放入上述剪碎的一塊或幾塊腫瘤組織塊（1-2mm3大小），用鑷子輕壓，使其粘于網上，再把但網放入培養皿中，使網下的組織塊與皿壁緊緊接觸，于37℃、5%CO2下培養，每隔2-3天換液一次，5天后可見有上皮細胞從網上移出，并能在相當于腫瘤組織部位形成純凈的單層上皮細胞。

4.脫落細胞法

將新鮮的腫瘤組織去除脂肪和結締組織，洗液洗2次后，用刀片將腫瘤組織切成細薄片，在切割的同時有許多上皮細胞脫落下來，脫落細胞經洗滌后，加入完全培養基，便可獲得較純的上層細胞，于培養瓶（或皿）中，37℃、5%CO2下培養，每隔2-3天換液一次，7-10天上皮細胞逐漸長成單層。

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