動物氣管和支氣管假復層纖毛柱狀上皮細胞的培養

實驗材料：

1. 大鼠或兔的氣管和支氣管

2. 0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液

3. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS（pH 7.4），含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml，pH7.4

4. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪，眼科鑷

5. 一次性注射器（1ml或5ml）

6. 200目不銹鋼網篩

7. 離心管（15ml、50ml）

實驗方法：

1. 在無菌條件下取氣管或支氣管，用PBS反復沖洗，以除去血液和粘液。

2. 將氣管或支氣管的一端結扎，另一端插套管并固定。用注射器經套管注入1%中性蛋白酶，至氣管充盈為止。將氣管浸泡于PBS中，在37℃條件下消化20min。

3. 用注射器抽取培養液，將注射器插入套管，反復沖洗，以分離氣管上皮細胞。然后，將氣管或支氣管游離端的結扎線剪斷，回收管腔內的細胞懸液。

4. 用200目不銹鋼網篩過濾，將濾液離心（1000r/min，10min）。棄上清液后，再用培養液洗滌離心1次。

5. 用培養液懸浮沉淀細胞，調整細胞密度至5×106 個/ml，接種于培養皿或培養板，放入37℃、5% CO2 培養箱內培養。

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