細胞培養的一些問題

1、液體培養基的保存是冷藏好？還是冷凍好？

要冷藏！因為液體培養基經冷凍后再經溶化時，其溶液的pH值會發生改變，溶液往往變堿，某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養基一定要存放在冷藏箱中，通常液體培養基在冷藏條件下可存放6個月～一年。

2、液體培養基中谷氨酰胺的作用，及使用方法

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺有較高的要求，細胞需要谷氨酰胺合成蛋白質，在缺少谷氨酰胺時，細胞生長不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20 ?C冰凍保存，用前加入培養基中。

加有谷氨酰胺的液體培養基4℃ 冰箱儲存兩周以上時，應重新加入原來量的谷氨酰胺。基礎醫學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支）。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml完全培養基中，其終濃度為2mM/ml培養基。包裝為粉紅色，-24℃保存。

3、培養用液pH對細胞生長的影響

由于大多數細胞適宜pH為7.2～7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不完全相同，原代培養細胞一般對pH變動耐受差，無限細胞系耐受力強。

但總體來說，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環境中更利于細胞生長。因此，我們在配制培養用液時，可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時，溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

4、常用培養基及培養用液的滲透壓范圍

培養基名稱 滲透壓范圍（mOSM）

DMEM（高糖） 315～350

DMEM（低糖） 270 ～330

RPMI-1640 260～290

MEM-EBSS 280～310

MEM-NEAA 280～310

McCoy5a 280～310

MEM-a 280～310

M—199 275～305

IMDM 270～300

DMEM/F-12 280～310

F—10 270～300

F—12 275～300

培養基名稱 滲透壓范圍（mOSM）

L—15 280～320

D-Hanks 280～300

Hanks 280～300

PBS 275～300

5、細胞傳代消化時所用胰酶濃度越高越好嗎？

不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有Ca++， Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下，pH 8.0， 溫度37 ℃其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。

我們每次進行傳代消化前，一定要用D-Hank's液或PBS液反復沖洗細胞培養瓶，以便于將含血清的培養基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為：

（1）0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA。

（2）0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA。

（3）0.25%胰蛋白酶。

溶液pH8.0～9.0，使用D-Hank's液配制。

多數細胞傳代消化可使用0.05%胰蛋白酶+0.02%EDTA這種消化液。

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