用于胚胎干細胞中飼養層細胞的原代培養

實驗材料

12.5d孕鼠、PBS、DMEM、血清、酒精、雙抗、解剖器、培養箱、超凈臺

實驗步驟

1.性成熟小鼠合籠（♀∶♂=2∶1）

2.每天觀察小鼠，見陰道栓后確定為懷孕0.5d。

3.取12.5d孕鼠，斷頸處死，在酒精中泡數秒消毒。控干酒精后置于一個無菌的培養皿中。

4.無菌條件下暴露子宮。每打開一層要換一套解剖器材（皮膚&腹膜）。

5.提起雙角子宮，再用一套新的解剖器剪去多余的子宮膜，剝離出胚胎，PBS洗三次。剪去胚胎頭部、四肢和腹部以及發育的內臟，只留下背部的中胚層（以成纖維細胞為主）。

6.將剩余胚胎盡量剪碎，小于1mm3，再用PBS洗三次，盡量棄去紅細胞。

7.在組織塊中加入血清（含雙抗），然后轉移到方瓶中。

8.在方瓶底部將大約25個組織塊鋪在瓶底，將方瓶倒置放入培養箱中，讓組織塊靠血清的作用粘附于瓶底，3h后，將方瓶正常放置，并加入DMEM培養。

9.3天后，觀察結果。

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