紅細(xì)胞裂解液的配制

紅細(xì)胞裂解液（Tris-NH4Cl）：稱取3.735g氯化銨、三羥甲基氨基甲烷（Tris）1.3g加水溶解并稀釋至500ml。0.22μm濾膜過濾除菌，4℃保存。細(xì)胞懸液加紅細(xì)胞裂解液后，混勻靜止4-5分鐘，待紅細(xì)胞完全破碎，1000r/min離心5分鐘，棄上清去除紅細(xì)胞，得到白細(xì)胞沉淀。
結(jié)果第一次用的時候，覺得還可以，第二次和第三次用的時候離心后發(fā)現(xiàn)有絮狀物質(zhì)，不能很好的沉淀出白細(xì)胞。

（一）1　試劑配制　　
原液1號：10 g葡萄糖+0.6 g磷酸二氫鉀+3.58 g磷酸氫二鈉（7H2O）+20 ml 5 g/L酚紅溶液，加雙蒸水定容至1 000 ml。

原液2號：1.86 g氯化鈣（2H2O）+4.0 g氯化鉀+80 g氯化鈉+1.04 g氯化鎂+2.0 g硫酸鎂（7H2O），加雙蒸水定容至1 000 ml。

應(yīng)用液有3種，1#：10 ml原液1號+10 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。

2#：20 ml原液1號+20 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。
3#：1 ml原液1號+1 ml原液2號，加雙蒸水定容至100 ml。

2　紅細(xì)胞裂解　
取100 μl抗凝全血，加2 ml應(yīng)用液3#，混勻15～20 s；加2 ml應(yīng)用液2#，混勻15～20 s；加4 ml應(yīng)用液1#，混勻15～20 s；300×g離心2 min，棄上清；收集沉淀，加PBS緩沖液，制成白細(xì)胞懸液，備用。
（這種紅細(xì)胞裂解法滿足了白細(xì)胞流式細(xì)胞儀檢測分選要求，價格低廉，是一種簡便快捷、經(jīng)濟(jì)實用的白細(xì)胞純化分選方法。

1 紅細(xì)胞裂解液(0.01mol/L Tris-HCL pH7.6; 0.01mol/L NaCl; 0.005mol/L MgCl2)

2 紅細(xì)胞裂解液（139.6 mmol/L NH4Cl, 16.96 mmol/L Tris, 用1 mol/L HCl調(diào) pH至7.2）

3 紅細(xì)胞裂解液的制備：碳酸氫鉀（KHCO3）1.0g；氯化氨（NH4CL）8.3g；EDTA-Na2 0.037g，加雙蒸水至1000ml，即工作液。

（該配方出自《實用流式細(xì)胞術(shù)彩色圖譜》）

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