細胞增殖與毒性檢測：RTCA技術法

一、核心技術介紹

實時無標記動態細胞分析技術（RTCA，Real Time Cellular Analysis）是通過特殊工藝，將微電子細胞傳感器芯片整合到細胞檢測板的底部，用以構建實時、動態、定量跟蹤細胞形態和增殖分化等改變的細胞阻抗檢測傳感系統。

當貼壁生長在微電極表面的細胞引起貼壁電極界面阻抗的改變時，這種改變與細胞的實時功能狀態改變呈相關性，通過實時動態的電極阻抗檢測可以獲得細胞生理功能相關的生物信息，包括細胞生長、伸展、形態變化、死亡和貼壁等。

二、主要儀器及設備

xCELLigence或iCELLigence 細胞功能分析儀及對應的E-Plate檢測板、超凈工作臺、CO2培養箱、低速離心機、移液器、細胞計數板、光學顯微鏡。

三、實驗步驟

1、向E-Plate檢測板中加入培養基并測定背景阻抗值。

2、收集對數期細胞并計數，調整細胞懸液濃度，向E-Plate檢測板中加入一定 體積的細胞，室溫超凈臺內放置30min。

3、將加入細胞的E-Plate檢測板放入檢測臺上（檢測臺預先放入培養箱中）， 進行實時動態的細胞增殖檢測。

4、過夜檢測后，向各培養孔中加入配制好的梯度藥物并繼續進行實時動態檢測， 即可獲得化合物介導的細胞效應曲線及不同時間段IC50值。

四、實驗結果實例

典型的利用RTCA技術獲得的細胞增殖實驗檢測結果：

利用RTCA技術獲得的典型的細胞毒性實驗檢測結果：

五、與傳統方法（MTT）對比優勢

1、實驗操作簡單，步驟少，人為誤差小。

2、采用無標記方法，不存在標記效率問題，并且對細胞無損傷，細胞在最接近生理狀態下進行檢測，結果準確度高。

3、實驗結果客觀，重復性好，不需設置重復孔（實驗操作需規范，如有特殊要求也可設置重復孔）。

4、因預先對基礎阻抗值測定，所以無需設置空白對照孔。

5、完整細胞效應圖譜，提供大量、重要的動態反應信息。

六、延伸實驗

可通過對細胞增殖及毒性的實時檢測，確定細胞變化的關鍵時間點，檢測后的細胞樣品可用于細胞形態學觀察、Western blot、Elisa、細胞凋亡及免疫熒光等細胞檢測實驗。

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