流式細胞儀PI染色死細胞方法

PI 能夠插入雙鏈 DNA 中。它被活細胞排斥但能穿透正在死亡或已經死亡的細胞的細胞膜。

Ⅰ 、材料

1、 PI （ e.g.,Cat #537059,Calbiochem,San Diego,CA ）

2、 緩沖體系： 1 × PBS(Ca2+ and Mg2+ free,e.g.,Cat#9240,Irvine Scientific,Santa Ana,CA)+2% 新鮮小牛血清＋ 0.1% 疊氮鈉

A、 PI 緩沖液

用緩沖液將 PI 溶解至終濃度為 1mg/ml 中，于 4 ℃ 下密封避光保存 1 個月。

B、 PI 濃縮液

用緩沖液將 PI 溶解至終濃度為 500mg/ml ，于 4 ℃ 下密封避光保存。我們已經檢測過將 PI 濃縮液放置數月后，并無觀察到染色活性的丟失。

Ⅱ 、方法：

將樣品細胞按程序描述的方法用 FITC 標記的單克隆抗體進行單色染色。

A、 在最后的洗滌步驟后，將樣品細胞懸浮于 PI 緩沖液中，于 4 ℃ 下密封避光保存以備通過流式細胞儀分析；

B、 在最后的洗滌步驟后，如前述將樣品細胞懸浮后備用。如果您想檢測樣品細胞活力，在每一管中加入 2 μ l 的 PI 濃縮液，混勻。將樣品置于 4 ℃ 下密封避光保存以備流式細胞儀分析。

注意：此法并不適用于甲醛固定的樣品。在根據 Sasaki 等人的方法（ Cytometry 8:413,1987 ）用 PE 標記的抗體對樣品進行染色時可以適用此方法。然而，由于 PI 和 PE 的發射光譜的廣泛交迭，因此本方法適于用 7- 氨基 - 放線菌素 D 將死細胞加以區分。

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