大黃中蒽醌類成分的提取分離和鑒定
概述
大黃記載于《神農本草經》等許多文獻中，用于泄下、健胃、清熱、解毒等。
自古以來，大黃在植物性瀉下藥中占有重要位置，是一位很早就被各國藥典所收載的世界性生藥。大黃的種類繁多，優質大黃是蓼科植物掌葉大黃（Rheum palmatclm L），大黃（R. officinale Baill）及唐古特大黃（R. tangutium Maxim.et Regll）的根莖及根，大黃中含有多種游離的羥基蒽醌類化合物以及它們與糖所形成的苷。已經知道的羥基蒽醌主要有下列五種：
大黃中蒽醌苷元，其結構不同，因而酸性強弱也不同。大黃酸連有-COOH，酸性最強；大黃素連有β-OH，酸性第二；蘆薈大黃素連有芐醇-OH，酸性第三；大黃素甲醚和大黃酚均具有1,8-二酚羥基，前者連有-OCH3和-CH3，后者只連有-CH3，因而后者酸性排在第四位。
實驗目的和要求
1．學習緩沖紙色譜的基本操作技術，并能根據色譜結果，設計液液萃取法分離混合物的實驗方案。
2．掌握PH梯度法的原理及操作技術。
3．通過磷酸氫鈣柱色譜分離大黃酚及大黃素甲醚的試驗，進一步熟悉柱色譜操作技術。
4．學習蒽醌類化合物鑒定方法。
實驗方法
1．大黃總蒽醌苷元的提取
注意：
①大黃中的蒽醌類成分大部分與糖結合，以蒽醌的形式存在于植物組織中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿、苯及乙醚等有機溶劑，用苯時應注意苯蒸氣的揮發，嚴防中毒；
②所得的氯仿液中如帶有酸水液，應該用分液漏斗分出棄去，并用蒸餾水回洗一次除去酸性以免影響梯度萃取。氯仿提取液放置中如有沉淀析出，可濾取之，該沉淀多為大黃素，余液進行下一步分離試驗用。
2．總蒽醌苷元分離方案的設計
1)大黃總蒽醌苷元的紙色譜
2) 蒽醌類成分的緩沖紙色譜試驗
3)最佳萃取劑及其用量的確定
4)蒽醌類成分各種萃取劑用量的確定
5)新分離方法的設計
3． 蒽醌類成分的分離與精制
① 大黃酸的分離與精制
將含有總游離蒽醌的氯仿液450ml移至1000ml的大分液漏斗中，加PH8緩沖液275ml振搖萃取，靜置至徹底分層，放出氯仿液后，到出堿水液至置250ml燒杯中，加HCl酸化至PH=3，待黃色沉淀析出完全后，過濾、干燥，干燥后的樣品加冰醋酸10ml加熱使溶，趁熱過濾，濾液靜置，析出黃色針晶為大黃酸，過濾即得純品。
② 大黃素的分離與精制
將提過大黃酸的氯仿液繼續移至分液漏斗中，用PH9.9緩沖液275ml振搖萃取，徹底分層后，分出堿水層，并用HCl酸化至PH=3，析出棕黃色沉淀，過濾，沉淀經干燥后，用10ml冰醋酸加熱使溶，趁熱過濾，析出橙色大針晶，過濾后，即得大黃素純品。
③ 蘆薈大黃素的分離和精制
余下氯仿液移至分液漏斗后，加5%NaCO3:5%NaOH (9:1) 堿水液540ml或用0.5%KOH540ml振搖萃取，堿水液加HCl酸化，析出的沉淀過濾干燥，用10ml乙酸乙酯重結晶，得黃色針晶的蘆薈大黃素純品。
④ 大黃酚和大黃素甲醚的分離--磷酸氫鈣柱色譜
4． 蒽醌類成分的鑒定
1) 紙色譜鑒定
2) IR光譜解析
本實驗講解要點及注意事項
1) pH梯度萃取的原理及注意事項。
2) 如何設計萃取分離方案的程序與方法。
3) 蒽醌化合物紅外光譜的特點。
4) 分離萃取時一定注意乳化層的分出，不要混入，并且每步最好用新鮮CHCl3，回洗堿水液。
5) 緩沖液的配制和堿液的配制要準確，嚴格注意檢查。
6) 每步萃取時，利用紙色譜檢查跟蹤萃取效果，如未達到預想效果應及時糾正。
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