基因組DNA提取方法
1、貼壁細胞用胰酶消化,離心收集。
2、細胞重懸于冰冷的PBS漂洗一次,離心收集。
3、重復2。
4、加入5ml DNA提取緩沖液,(10m mol/L Tris-cl,0.1 mol/L EDTA,0.5% SDS),混勻。
5、加入25ul 蛋白酶K,使終濃度達到100ug/ml,混勻,50℃水浴3h。
6、用等體積的酚抽提一次,2500r/min 離心收集水相。用等體積的(酚,氯仿,異戊醇)混合物抽提一次,2500r/min 離心收集水相。
用等體積的氯仿,異戊醇抽提一次。
7、加入等體積的5mol/L 的LiCL,混勻,冰浴,10min。
8、2500r/min,離心10min. 轉上清與一離心管中。加入等體積的異丙醇。室溫10分鐘。
9、2500r/min,離心10min。棄上清。加入0.1倍 體積3mol/L 乙酸鈉(PH5.2)與2倍體積-20℃預冷無水乙醇。-20℃ 20分鐘。
10、12000r/min, 室溫離心5分鐘。棄上清。將DNA溶于適量TE中。
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