琥珀酸脫氫酶的作用及競(jìng)爭(zhēng)性抑制的觀察

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（一）原 理

琥珀酸脫氫酶是三羧酸循環(huán)中的一個(gè)重要的酶，測(cè)定細(xì)胞中有無(wú)這種酶可以初步鑒定三羧酸循環(huán)途徑是否存在。

琥珀酸脫氫酶可使其底物脫氫，產(chǎn)生的氫可通過(guò)一系列傳遞體最后遞給氧而生成水。

在缺氧的情況下，若有適當(dāng)?shù)氖軞潴w也可顯示出脫氫酶的作用。如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下之氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無(wú)色的甲烯白。

這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用。

丙二酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)與琥珀酸相似，它能與琥珀酸競(jìng)爭(zhēng)而和琥珀酸脫氫酶結(jié)合。若琥珀酸脫氫酶已與丙二酸結(jié)合，則不能再催化琥珀酸脫氫，這種現(xiàn)象稱為競(jìng)爭(zhēng)性抑制。如相對(duì)地增加琥珀酸的濃度，則可減輕丙二酸的抑制作用。

（二）試 劑

1．1.5%琥珀酸鈉溶液：稱取琥珀酸鈉1.5g，用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。如無(wú)琥珀酸鈉可用琥珀酸配成水溶液后，以氫氧化鈉溶液中和至pH7~8。

2．1%丙二酸鈉溶液：稱取丙二酸鈉1g，用蒸餾水溶解并稀釋至100ml。

3．0.02%甲烯藍(lán)溶液。

4．1/15mol/LNa2HPO4溶液：取Na2HPO4 · 2H2O 11.8g，用蒸餾水溶解并稀釋至1 000ml。

5．液體石蠟。

（三）操 作

1．豬心臟制備液：稱取新鮮豬心1.5~2.0g放組織搗碎機(jī)中，加入等體積的石英砂及1/15mol/LNa2HPO4溶液3~4ml，搗碎成漿，再加入6~7ml1/15mol/LNa2HPO4溶液，放置1小時(shí)，不時(shí)搖動(dòng)，離心取上清液備用。

2．取4支試管，編號(hào)并按下表操作：

3．各管溶液混勻后，每管各加液體石蠟一薄層（約5~10滴）。

4．各管置于37℃水浴中，半小時(shí)內(nèi)觀察各管顏色變化，比較其速度并說(shuō)明原因。然后將第1管用力搖動(dòng)，觀察其有何變化

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