實(shí)驗(yàn)室常用緩沖液匯總
1、1M Tris-HCl （pH7.4，7.6，8.0）
□組份濃度 1 M Tris-HCl
□配制量 1L
□配置方法 1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。
2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。
pH值 濃HCl
7.4 約70mL
7.6 約60mL
8.0 約42mL
4. 將溶解定容至1L。
5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
2、1.5 M Tris-HCl （pH8.8）
□組份濃度 1.5 M Tris-HCl
□配制量 1L
□配置方法 1.稱取181.7gTris置于1L燒杯中。
2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。
4. 將溶液定容至1L。
5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1℃，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。
3、10×TE Buffer （pH 7.4，7.6，8.0）
□組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
□配制量 1L
□配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。
1 M Tris-HCl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL
500 mM EDTA（pH8.0） 20mL
2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。
3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。
4. 室溫保存。
4、3 M 醋酸鈉 （pH5.2）
□組份濃度 3 M 醋酸鈉
□配制量 100mL
□配置方法 1. 稱取40.8gNaOAc?3H2O置于100～200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/span>
2. 加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。
3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。
4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
5、PBS Buffer
□組份濃度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
□配制量 1L
□配置方法 1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中。
NaCl 8 g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.42 g
KH2PO4 0.27g
2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?/span>
3. 滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。
4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。
注意：上述PBS Buffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。
6、10 M醋酸銨
□組份濃度 10 M醋酸銨
□配制量 100mL
□配置方法 1. 稱量77.1g醋酸銨置于100～200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?/span>
2.加去離子水將溶液定容至100mL。
3.使用0.22μm濾膜過濾除菌。
4.密封瓶口于室溫保存。
注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。
7、Tris- HCl平衡苯酚
□配置方法
使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對(duì)其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對(duì)DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。
2. 操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。
3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對(duì)苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
① 液化苯酚應(yīng)貯存于-20℃，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68℃水浴中使苯酚充分溶解。
② 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1％。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識(shí)別有機(jī)相。
③ 加入等體積的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。
④ 重復(fù)操作步驟③。
⑤ 加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。
⑥ 重復(fù)操作步驟⑤，稍微殘留部分上層水相。
⑦ 使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。
⑧ 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。
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