細胞凍存液
細胞凍存液是一種關(guān)鍵的保存細胞的溶液，通常含有保護劑如甘油或二甲基亞砜。這些保護劑能夠降低溶液的冰點，在細胞凍存和解凍過程中起到保護細胞的作用。在凍存過程中，細胞凍存液幫助細胞脫離生長狀態(tài)，保留細胞的特性，避免冰晶的形成導致細胞受損。通過緩慢降溫和快速解凍的原則，細胞凍存液能夠有效地保存細胞，并在需要時進行細胞的復蘇和應用于實驗研究中。
細胞凍存液是一種專門用于在低溫或超低溫環(huán)境下保存細胞的特殊液體，其主要功能是保護細胞免受冰晶形成和滲透壓變化等不利因素的影響，從而保持細胞的活性和功能。以下是關(guān)于細胞凍存液的詳細介紹：
組成成分
二甲基亞砜（DMSO）：DMSO是一種有機溶劑，可以降低細胞膜的滲透壓，防止細胞因冰晶形成而破裂。DMSO是細胞凍存液中最常用的成分，其濃度通常在5%到10%之間。
胎牛血清（FBS）：FBS含有豐富的蛋白質(zhì)和生長因子，可以為細胞提供營養(yǎng)和保護。FBS是細胞凍存液中常用的成分，其濃度通常在10%到20%之間。
肝素：肝素是一種抗凝劑，可以防止細胞在凍存過程中發(fā)生凝集。
葡萄糖：葡萄糖可以為細胞提供能量，并幫助細胞在復蘇后恢復活力。
用途
用于造血干細胞、間充質(zhì)干細胞等干細胞的儲存。
用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。
用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。
保護機制
防止結(jié)冰損傷：水在冷凍時會形成冰晶，這些冰晶可能損傷細胞。細胞凍存液中的保護劑可以減少冰晶的形成，從而保護細胞。
降低細胞內(nèi)外的滲透壓：保護劑如DMSO可以降低細胞膜的滲透壓，減少細胞內(nèi)水分的外滲，避免細胞過分脫水皺縮。
抑制細胞代謝：DMSO還可以抑制細胞代謝，減緩細胞老化。
配制方法
將DMSO和FBS加入基礎(chǔ)培養(yǎng)液中，各自含量占總體積的一定比例，然后濾膜過濾后分裝保存?zhèn)溆谩?/span>
常用的凍存液組成成分可以是20%血清（FBS）、10%DMSO、70%1640培養(yǎng)液；或90%血清（FBS）、10%DMSO。
注意事項
DMSO不用高壓滅菌；基礎(chǔ)培養(yǎng)液如DMEM不能高溫高壓滅菌，可以過濾除菌。
DMSO要用新的，而且要避光保存。
細胞凍存液的正確使用對于保持細胞的活性和功能至關(guān)重要，它在細胞培養(yǎng)、細胞保存以及科研領(lǐng)域中扮演著不可或缺的角色。
一、實驗室常用的細胞凍存液
實驗室常用的細胞凍存液包括含有血清和DMSO的配方，以及無血清的細胞凍存液。其中，含有20%血清（FBS）、10% DMSO、70%培養(yǎng)基的配方用于冷凍保存細胞，在解凍時需要去除上清中的DMSO。無血清細胞凍存液的配方較為復雜，可能主要含有人血清白蛋白、DMSO、復方電解質(zhì)注射液和右旋糖苷，或者含有DMSO、葡萄糖等細胞營養(yǎng)成分，增強細胞存活率和活力，減少污染。
另外，羧化ε-聚-?-賴氨酸（COOH-PLL）組成的多兩性電解質(zhì)細胞凍存液展現(xiàn)出優(yōu)異的冷凍保護特性，有效保護多種細胞類型在冷凍過程中的活力特征。綜合來看，不同種類的細胞凍存液在細胞凍存和保護方面發(fā)揮著重要作用，為實驗室研究提供了可靠的支持。
20%血清（FBS）、10%DMSO、70%培養(yǎng)基：這是一種常用的細胞凍存液配方，適用于多數(shù)細胞系，能夠保證細胞在凍存過程中有較高的存活率。這種配方通過提供血清中的營養(yǎng)成分和DMSO的保護作用，幫助細胞在冷凍和解凍過程中減少損傷。
90%血清（FBS）、10%DMSO：這種配方適用于需要特別保護的細胞系，比如長時間保存或特別珍貴的細胞系。高比例的血清可以提供更多的保護，減少細胞在凍存過程中的損傷。
商品化的無血清細胞凍存液：這類凍存液不含血清和動物來源的蛋白，減少病毒、霉菌和支原體等的污染風險，適合無血清培養(yǎng)細胞和蛋白表達細胞。它們通常含有DMSO、葡萄糖等細胞營養(yǎng)成分，適用于各種常見和腫瘤動物細胞株，凍存的細胞可在-80℃長期保存，無需經(jīng)過程序性降溫過程。
羧化 ε-聚-?-賴氨酸 （COOH-PLL）組成的多兩性電解質(zhì)細胞凍存液：這是一種新型的凍存液，利用COOH-PLL的多兩性電解質(zhì)特性，為細胞提供保護。這種凍存液的具體應用和效果可能需要進一步的專業(yè)文獻支持，但在搜索結(jié)果中沒有找到具體的詳細信息。
二、其他細胞凍存液
DMSO-培養(yǎng)基凍存液：這種凍存液使用二甲基亞砜（DMSO）和培養(yǎng)基的混合物來凍存細胞。DMSO可以有效地降低細胞凍結(jié)過程中的冰晶形成，以保護細胞免受凍結(jié)損傷。
Glycerol-培養(yǎng)基凍存液：使用甘油和培養(yǎng)基的混合物來凍存細胞。甘油可以提供類似DMSO的保護作用，適用于一些對DMSO敏感的細胞系。
FBS-培養(yǎng)基凍存液：使用胎牛血清（FBS）和培養(yǎng)基的混合物來凍存細胞。FBS提供了營養(yǎng)和保護細胞的因子，對某些細胞系有更好的保護效果。
細胞保存液（Cell Preservation Solution）：一些商業(yè)化的細胞保存液可以直接用于細胞凍存，其中包括某些特殊的保護劑和緩沖液，可以提供更好的細胞存活率。
Serum-Free Cryopreservation Solution：無血清的凍存液，可以用于細胞系凍存，并減少由血清成分引起的擾動。
CELLBANKER2 細胞凍存液：這是一種無血清完全細胞凍存液，通用于各種動物細胞株。特別配方有效提高細胞存活率和活力。不含動物來源性蛋白，能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染，確保凍存細胞安全。
BeyoAOF?無血清細胞凍存液：碧云天生產(chǎn)的這種凍存液不含血清、無蛋白、無須程序降溫并能長期-80℃保存細胞的即用型細胞凍存液，適用于絕大部分的哺乳動物細胞凍存。
CryoStor CS10 臨床級即用型細胞凍存液：美國Biolife品牌的產(chǎn)品，預先配制了USP級DMSO，這是一種滲透性冷凍保護劑，有助于減輕冰的形成造成的損害。
賽存生物全系列細胞凍存液：包括免疫細胞凍存液、干細胞凍存液、卵母細胞/胚胎凍存液及組織凍存液等。
Kryoplus?原代細胞凍存液：使用DMSO預配制，為各類細胞系、原代細胞在凍存和復蘇過程中提供安全可靠的保護環(huán)境。
文章來源：環(huán)凱（官網(wǎng)：huankai.com）轉(zhuǎn)載于“ 學術(shù)策 ”公眾號；原作者~小1。
