菌種傳代次數必須在5代以內？
菌種傳代次數控制在5代以內的原因主要包括以下幾點：
● 防止菌種衰退：傳代次數越多，菌種發生自發突變（尤其是負突變）的幾率越高，特別是那些可能導致菌種特性衰退的突變。傳代次數過多，群體中個別的衰退型細胞數量增加并占據優勢越快，導致群體表型出現衰退。
● 控制菌種變異風險：過度的傳代會增加菌種變異的風險，影響菌種的標準作用和特性。中國藥典規定，培養基靈敏度檢查所用的菌株傳代次數不得超過5代，以防止菌株因傳代次數過多引起衰退影響檢驗。
● 保持菌種的遺傳穩定性：傳代次數的控制有助于保持菌種的遺傳穩定性，避免因過度傳代導致的表型變化和遺傳突變。
● 確保檢驗和生產效率：使用已衰退的菌種進行生產會影響生產效率，而把已衰退菌種作為陽性菌株進行檢驗，則會影響檢驗正確率。
● 遵循藥典規定：《中國藥典》2020年版9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則中指出，工作菌株的傳代次數應嚴格控制，不得超過5代（從菌種保藏機構獲得的標準菌株為第0代）。
“5代”是經驗值還是理論值？
菌種傳代次數必須控制在5代以內是經過長期實踐積累得出的經驗結論。這一經驗值的確立旨在避免長期傳代導致菌種的遺傳特性喪失或發生變異，從而確保菌種在研究和生產中具有穩定的遺傳特性和生物活性。因此，控制菌種傳代在5代以內可以有效減少菌種的變異風險，保證實驗和生產的可靠性和穩定性。
“5代”這個數字既包含了經驗值也有一定的理論依據。它是基于微生物學研究中的經驗積累得出的結論，目的是為了減少由于長期傳代導致的菌種退化或變異，確保研究和生產中使用的菌種具有穩定的遺傳特性和生物活性。這個數字并不是隨意設定的，而是基于實驗和實踐，認為5代傳代次數是一個合理的限制，以保持菌種的穩定性和可靠性。
同時，也有理論支持，因為傳代次數越多，菌種發生變異的風險越高，而5代傳代次數被認為可以較好地平衡菌種的穩定性和實驗的需要。因此，5代傳代次數的規定是一個結合了經驗和理論的結果。
“菌種傳代次數必須在5代以內？5代以上行不行？
根據常識，菌種的傳代次數與變異率呈正相關，傳代次數越多，變異風險越高。雖然并非絕對禁止使用5代以上的菌種，但超過5代后，菌種的穩定性和可靠性會受到威脅，容易導致問題的出現。
只有當經過5代傳代后，菌種的形態結構、生理生化性狀等仍然保持不變時，才能考慮繼續使用。然而，在實驗過程中，過多傳代仍然是不建議的，因為這會增加變異和風險的可能性，相當于“自取其禍”。因此，最好遵循傳統經驗，控制菌種傳代在5代以內，以確保實驗和生產的準確性和可靠性。
至于5代以上是否可行，原則上是不建議的。因為超過5代后，菌種變異的風險會增加，可能會導致菌種的表型變化、遺傳突變和污染的可能性增加。雖然并沒有說5代以上的菌種就不能使用，但是越容易出現問題。
如果5代以上菌種的形態結構、生理生化性狀等均未發生變化，理論上還是可以使用的，但在實驗過程中，并不建議過多傳代。因此，為了保持菌種的遺傳穩定性和實驗結果的準確性，通常推薦控制在5代以內。
依據是什么？
根據《中國藥典：2020年版?四部-9203藥品微生物實驗室質量管理指導原則》，工作菌株的傳代次數應嚴格控制在5代以內。這一規定旨在防止過度傳代增加菌種變異的風險。在該標準中，將活的培養物接種到微生物生長的新鮮培養基中培養被定義為傳代1次，任何形式的轉種都被計算在內。實驗室在必要時應對工作菌株的特性和純度進行確認，以確保實驗結果的準確性和可靠性。
參照方法：
根據微生物菌種傳代技術知識圖譜中的相關內容，結合收集的大量文獻資料，并總結成一篇文章，可以得出菌種傳代次數必須在5代以內的結論。這一結論的參考來源包括對菌種傳代技術的系統性了解和對過往文獻資料的深入研究。通過這些參照方法，我們能夠更好地理解和確認控制菌種傳代在5代以內的重要性，并確保菌種的遺傳特性和生物活性的穩定性。
菌種如何保藏？
根據藥典中的規定和微生物菌種保藏與活化技術指南，菌種傳代次數必須控制在5代以內。為延長菌種保存時間，建議采用低溫冷凍干燥、液氮貯存、超低溫冷凍等方法保存菌種，其中低于-70℃或低溫冷凍干燥可有效延長保存時間。標準儲備菌株可用于每月或每周1次轉種制備工作菌株。
值得注意的是，冷凍菌種一經解凍轉種制備工作菌株后，不得重新冷凍和再次使用，以確保菌種的穩定性和純度。因此，在進行菌種傳代時，除了控制傳代次數在5代以內外，還應嚴格遵循正確的菌種保存方法，以確保菌種的質量和穩定性。
操作中，如何確認是哪一代菌種？
在實際操作中，確認菌種的代數是一個重要的任務，尤其是在實驗室菌種管理不夠規范的情況下。當實驗室接收到菌種時，可以將接收到的菌種作為0代，并進行形態學鑒定和生理生化特性檢測，評估菌株的活力。如果鑒定結果正常且菌株沒有問題，即可將此批菌株確定為F0，即母代菌種。
然而，需要明確的是，這些菌株并非藥典中規定的0代菌種。在實際操作中，建議實驗室對接收到的菌株進行詳細記錄和標記，包括來源、接收時間等信息，以便追蹤并確認菌株的代數。通過嚴格的記錄和標記以及定期進行鑒定和檢測，可以更好地管理和監控菌種的代數，確保傳代次數控制在規定的5代以內。
文章來源：環凱（官網：huankai.com）轉載于“ 學術策 ”公眾號；原作者~小1。
