倒平板技巧分享
倒平板在生物實驗中是一個至關重要的環節，廣泛應用于細菌培養、分子生物學實驗的日常操作中。無論是在環境監測、水質監測，還是微生物檢查中，準確有效地倒平板都是獲得實驗成功的前提。然而，初學者往往在這一過程中面臨諸多挑戰。為此，本文將總結幾點小技巧，以幫助初學者提升倒平板供大家參考：
一、培養基溫度確定：
1.標準要求：熔化后的培養基放入47 ℃~50 ℃的恒溫裝置中冷卻保溫(可根據實際培養基凝固溫度適當提高恒溫裝置溫度)，直至使用，培養基達到47 ℃~50℃的時間與培養基的品種、體積和數量有關。(GB 4789.28-2024)
2.固體培養基傾注的溫度在45℃-50℃，怎么確定？
技巧：用手心輕輕碰一下盛固體培養基的三角瓶，感覺不燙，然后用手背也感覺一下，感覺燙手，這時的溫度大概是50℃。（口訣：手心不燙手背燙）。
3.為什么要確定培養基溫度？
溫度過高，培養基凝固時間過長，培養皿皿蓋上會出現大量冷凝水，不利于后續實驗。
對于需要添加不耐熱的抗生素等試劑的培養基，溫度過高，試劑容易失效。
二、防止培養皿中有冷凝水：
1、待固體培養基降低溫度至45℃-50℃，開始倒平板，此時水蒸氣蒸發速度減慢，皿蓋產生的水就少。
2、即使溫度至45℃-50℃，培養皿蓋還是有水蒸氣、還是會有水珠，怎么辦？倒平板的時候把皿蓋打開，待全部倒完后，超凈臺里凝固5min后，關閉皿蓋，倒置放置，備用。（不嚴謹）
3、在倒培養基時，可以一個壘一個，靜置直到全部培養皿凝固，倒置備用。這種方法，除了最上面的皿蓋有水蒸氣，其余皿蓋都不會有水蒸氣產生。（專家不建議這樣操作）
三、預防培養基氣泡形成：
(1) 滅菌之前，瓊脂粉要充分溶解。
(2) 滅菌后待溫度降至50-60℃，輕輕沿壁搖勻，讓培養基整體沿著同一個方向搖起來，直到搖勻為止。
(3) 滅菌之后，需要添加抗生素等試劑的培養基待溫度降至45-50℃，再加入抗生素等試劑，輕輕沿壁搖勻，讓培養基整體沿著同一個方向搖起來，直到搖勻為止。
(4) 已經產生好多氣泡，又消不掉的培養基，用微波爐等加熱設備重新加熱一下，溫度高了氣泡也就從培養基中跑出來啦。
四、倒平皿保持均一性：
傾注平皿要左三圈，右三圈的晃動，注意不要把平皿蓋沾上，并且要輕輕晃動。
五、具體對待：
前面幾點講了倒平皿的最適溫度保持在45-50度，但不同品牌的瓊脂質量不一樣，同樣按照國標中的配方瓊脂含量1.5%， 有些瓊脂凝固很快，有些凝固慢一些，還有環境溫度偏低，瓊脂凝固也會快一些，要根據實際情況，適當調整瓊脂的含量，在室溫較低時我們所配的培養基瓊脂 用量就偏少一些，還有在倒平板和混勻時動作要快一些，室溫實在太低，也可以把培養皿放到烘箱中適當加熱一下（40度左右）。
六、培養基厚度：
1、傾注熔化的培養基至平皿中(直徑90 mm的平皿﹐通常要加入15 mL ~20 ml.瓊脂培養基)，使之在平皿中的厚度至少為3 mm。如果平板需貯存，或者培養時間超過48 h或培養溫度高于40 ℃，則需要傾注更多的培養基（GB4789.28-2024）。
但是具體操作如何把握，這是個難題？
技巧：倒平板的時候，鋪滿整個培養皿底部，稍微再倒一點點就是20mL，再稍微多倒一點點就是25mL，這個需要經驗，多倒幾次就能把握。
來源：“食品微生物檢測”公眾號，內容版權歸原作者所有。
