pH對酶活力的影響——最適pH的測定
實驗（二） pH對酶活力的影響——最適pH的測定
[原理]
pH對酶活力的影響極為顯著。酶表現(xiàn)其最高活性時所處的pH即酶的最適pH，因為通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才表現(xiàn)它的活力；一種酶在不同pH條件下所表現(xiàn)出來的活性不同。
pH之所以對酶活性有很大影響，很可能是因為它改變了酶活性部位有關(guān)基團的解離狀態(tài)。在最適pH時，酶分子上活性基團的解離狀態(tài)，最適于酶與底物的結(jié)合；而高于或低于最適pH時，酶活性部位基團解離狀態(tài)不利于酶與底物的結(jié)合，酶活力也相應(yīng)降低。pH也可影響底物的解離及反應(yīng)系統(tǒng)中其它組分的解離。緩沖系統(tǒng)的離子性質(zhì)和離子強度，也可能對酶反應(yīng)產(chǎn)生影響。另外，pH除了對酶活性有很大影響外，對酶的穩(wěn)定性也有很大影響。過高過低的pH會改變酶的活性中心的構(gòu)象，或甚至改變整個酶分子的結(jié)構(gòu)使其變性失活。
本實驗測定pH對酸性磷酸酯酶活性的影響并測定最適pH。
[方法和步驟]
取11支試管0～10編號，0號為空白。各管加入0.1mL 25mmol/L磷酸苯二鈉水溶液。從l號管至10號管依次加入不同pH的緩沖液0.4mL，搖勻。于35℃恒溫水浴預(yù)熱2min。各管記時加入稀釋好的酶液0.5mL，充分搖勻，精確反應(yīng)15min后，加入1mol/L碳酸鈉溶液2mL，再加入0.5mL Folin-酚稀溶液，繼續(xù)保溫顯色10min。空白管所加 試劑 相同，但酶液最后加入。取出冷卻后，以0號管作空白，置 分光光度計 中在680nm波長處讀取各管的吸光度A 680 值。
管號 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 0* |
反應(yīng)pH | 2 | 3 | 3.5 | 4 | 4.5 | 5 | 5.5 | 6 | 6.2 | 7 | 5.5 |
25mmol/L磷酸苯二鈉 | 各0.1mL | ||||||||||
相應(yīng)pH緩沖液 | 各0.4mL | ||||||||||
35℃預(yù)熱2min | |||||||||||
稀釋酶液 | 各0.5mL | ||||||||||
35℃精確反應(yīng)15min | |||||||||||
1mol/L碳酸鈉溶液 | 各2.0mL | ||||||||||
Folin-酚稀溶液 | 各0.5mL | ||||||||||
35℃保溫顯色10min | |||||||||||
A 680 | |||||||||||
注：0號管反應(yīng)pH為5.5，酶液最后加入。
[數(shù)據(jù)處理]
以反應(yīng)pH為橫坐標，A 680 （代表初速度）為縱坐標，繪制pH～酶活力曲線，求出酸性磷酸單 酯酶 在本實驗條件下的最適pH。
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