水產(chǎn)品中喹烯酮殘留量的測定——高效液相色譜法（一）
1 范圍
本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中喹烯酮殘留量測定的高效液相色譜法。
本標準適用于水產(chǎn)品中喹烯酮殘留量的測定。
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB/T 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法
SC/T 3016 水產(chǎn)品抽樣方法
3 原理
以乙酸乙酯提取樣品中殘留的喹烯酮，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，流動相溶解，正己烷脫脂，用液相色譜儀-紫外檢測法檢測，外標法定量。
4 試劑
本標準所用試劑除標明外，其他均為分析純或更高純度。
4.1 水：符合GB/T 6682 一級純水的要求。
4.2 乙酸乙酯。
4.3 正己烷。
4.4 乙腈：色譜純。
4.5 喹烯酮標準品：純度≥99.0%。
4.6 喹烯酮標準儲備液：準確稱取標準品10mg，加少量乙腈溶解，用乙腈定容至100mL棕色容量瓶中，保存于2°C~8°C冰箱中（保存期不超過1個月）。該喹烯酮標準儲備溶液濃度為100μg/mL。
4.7 喹烯酮系列標準工作液：用乙腈將標準儲備液稀釋至10μg/mL作為標準中間液，準確量取喹烯酮標準中間液，用流動相稀釋成0.02μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL系列標準工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。
5 儀器和設備
5.1 液相色譜儀，具紫外檢測器。
5.2 高速勻漿機。
5.3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.4 分析天平，感量0.0001g。
5.5 天平，感量0.01g。
5.6 離心機：5 000r/min。
5.7 離心機：14 000r/min。
5.8 渦旋混合器。
5.9 具塞離心管：50mL。
5.10 離心管：2.5mL。
5.11 雞心瓶：100mL。
6 試樣制備
6.1 樣品預處理
水產(chǎn)品取可食肌肉部分，樣品切成小塊后混勻，均質(zhì)成肉糜，置于0°C?4°C 冰箱中備用，若不能及時檢測時，放置一18°C冰箱中儲存?zhèn)溆谩?/span>
6.2 提取
準確稱取試樣(5+0.02)g肉糜樣品于50mL具塞玻璃離心管中，加入8mL水，勻漿30s，加入乙酸乙酯15mL，渦旋混合3min，4500r/min離心5min，取上清液于100mL雞心瓶中。
另取一50mL離心管加入15mL乙酸乙酯，清洗勻漿機刀頭，清洗液移入前一離心管中，用玻璃棒搗散離心管中的沉淀，渦旋混合3min，4500r/min離心5min，上清液并入100mL雞心瓶中。在50mL離心管中繼續(xù)加入15mL乙酸乙酯，重復上述操作一次。合并3次提取液備用。
6.3 凈化
備用液于40°C水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，加1.0mL流動相溶解，再加入1mL正己烷，渦旋混合1min，轉(zhuǎn)入2.5mL離心管中，10000r/min離心5min，棄去正己烷層，上清液經(jīng)0.45μm有機微孔濾膜過濾后供液相色譜分析。
6.4 色譜條件
6.4.1 色譜柱：苯基柱，250mmX4.6mm，5μm，或性能相當者。
6.4.2 流動相：乙腈+水=50+50(V+V)。
6.4.3 流速：1.0mL/min
6.4.4 柱溫：30°C
6.4.5 檢測器波長：312nm
6.4.6 進樣量：20 μL
6.5 樣品測定
將20μL喹烯酮系列標準工作液及樣品液分別注入液相色譜儀中，按上述色譜條件進行色譜分析，記錄峰面積，響應值均應在儀器檢測的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)標準樣品的保留時間定性，外標法定量。喹烯酮液相色譜圖見附錄A。
6.6 空白對照試驗
除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。
文章來源：《水產(chǎn)品獸藥殘留限量及監(jiān)測方法查詢手冊》
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