GB 31657.9-2025 蜂產品中酞丁安殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法

隨著食品安全監管體系的不斷完善，蜂產品中藥物殘留檢測已成為保障消費者健康的重要環節。酞丁安作為一種抗病毒藥物，若在蜜蜂養殖過程中違規使用，其殘留可能通過蜂產品進入人體，對健康構成潛在風險。GB 31657.9-2025《蜂產品中酞丁安殘留量的測定 液相色譜-串聯質譜法》作為我國首個針對蜂產品中酞丁安殘留檢測的專項國家標準，于2025年9月1日正式實施。該標準采用液相色譜-串聯質譜法（LC-MS/MS）結合固相萃取（SPE）凈化技術，實現了蜂蜜中酞丁安殘留的高靈敏度、高準確性檢測，為蜂產品質量安全監管提供了科學依據。

標準核心內容與技術要點
1. 檢測原理與適用范圍
GB 31657.9-2025標準基于“水提取-固相萃取凈化-液相色譜-串聯質譜檢測”的原理，適用于蜂蜜中酞丁安殘留量的定量分析。其核心流程包括：樣品溶解、離心分離、固相萃取柱凈化、氮吹復溶及LC-MS/MS檢測，通過外標法定量計算殘留量。
2. 關鍵試劑與材料
標準品：酞丁安標準品純度需≥95%，CAS號為210165-00-7。溶劑：乙腈、甲醇、N,N-二甲基甲酰胺（DMF）均為色譜純，水需符合GB/T 6682一級水標準。固相萃取柱：采用200mg/6mL苯基柱，其選擇性可有效富集酞丁安并去除基質干擾。標準溶液配制：通過DMF助溶配制1000μg/mL標準儲備液，再用乙腈稀釋至10μg/mL工作液，-18℃避光保存，有效期1個月。
3. 儀器設備與色譜條件
液相色譜系統：配備C18色譜柱（100mm×3.0mm，2.7μm），流動相為0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B），采用梯度洗脫程序：0-2分鐘B從45%升至100%，保持1分鐘，3.1分鐘恢復初始比例并平衡至6分鐘。質譜系統：電噴霧離子源（ESI+），多反應監測（MRM）模式，定量離子對為m/z 378.1→287.1（碰撞能量10eV），定性離子對為m/z 378.1→318.9（碰撞能量6eV）。
4. 方法學驗證指標
靈敏度：檢出限（LOD）為2μg/kg，定量限（LOQ）為5μg/kg，滿足蜂產品中痕量殘留檢測需求。準確度：在5-200μg/kg添加水平下，回收率為93.67%-99.61%，符合國際食品法典委員會（CAC）對農藥殘留檢測回收率（70%-120%）的要求。精密度：日內RSD為2.74%-4.73%，日間RSD為2.3%-3.87%，重復性優于歐盟EC 401/2006標（RSD≤15%）。

標準實施的技術優勢與行業影響
1. 技術突破：解決基質干擾難題
蜂蜜基質復雜，含糖類、有機酸等成分，易干擾目標物檢測。GB 31657.9-2025標準采用苯基固相萃取柱，通過π-π相互作用選擇性吸附酞丁安，同時用二氯甲烷-乙腈溶液洗脫，有效去除糖類等極性干擾物。研究顯示，該方法基質效應（ME）為-5.2%至3.1%，接近理想值（ME=0），顯著優于傳統C18柱（ME=-15%至-8%）。
2. 行業規范：填補國內標準空白
此前，我國蜂產品中酞丁安檢測缺乏統一方法，部分企業采用HPLC-UV法，但靈敏度不足（LOQ≥50μg/kg）。本標準實施后，檢測靈敏度提升10倍，可滿足歐盟（MRL=10μg/kg）等國際市場要求，助力我國蜂產品出口貿易。據農業農村部公告，2025年9月起，所有出口蜂產品需按本標準檢測，未達標產品將被禁止出口。
3. 監管支撐：強化食品安全溯源
標準明確要求檢測機構需配備LC-MS/MS設備，并定期參與能力驗證。2025年8月，國家市場監督管理總局組織首次酞丁安殘留檢測能力驗證，全國127家實驗室參與，其中98家獲“滿意”結果，合格率77.2%。未通過驗證的實驗室需限期整改，否則將暫停其檢測資質。

實際應用案例與操作要點
1. 蜂蜜樣品前處理優化
結晶樣品處理：對結晶蜂蜜，需在密閉容器中于≤60℃水浴解晶，避免高溫導致酞丁安降解。離心條件控制：4℃下8000r/min離心10分鐘，可有效分離蛋白質等大分子雜質，減少固相萃取柱堵塞風險。洗脫溶劑選擇：二氯甲烷-乙腈（20:80，v/v）洗脫效率優于純乙腈，回收率提高8%-12%。
2. 儀器參數優化與故障排除
質譜調諧：定期用酞丁安標準溶液（10μg/L）進行質譜調諧，確保離子對豐度比符合要求（378.1→287.1/378.1→318.9=3:1）。色譜柱維護：每分析50個樣品后，用甲醇-水（90:10，v/v）沖洗色譜柱30分鐘，防止柱效下降。基質效應補償：對高糖樣品，可采用基質匹配標準曲線法，即在空白蜂蜜提取液中添加標準品制備校準曲線，消除基質抑制效應。

未來展望與標準化建議
1. 多殘留檢測方法開發
目前，蜂產品中抗病毒藥物殘留檢測標準僅涵蓋酞丁安等少數品種。建議后續制定包含阿昔洛韋、更昔洛韋等在內的多殘留檢測標準，采用高分辨質譜（HRMS）技術實現“一次進樣、多組分定量”。
2. 快速檢測技術研發
結合免疫層析技術，開發蜂產品中酞丁安快速篩查試紙條，將檢測時間從6小時縮短至15分鐘，滿足現場監管需求。目前，中國農科院蜜蜂研究所已研制出原型產品，靈敏度達10μg/kg，正在進行方法驗證。
3. 國際標準互認
推動本標準與CODEX STAN 333-2025《蜂產品中獸藥殘留限量》對接，參與國際食品法典委員會（CAC）標準制定，提升我國在蜂產品安全領域的國際話語權。

結語
GB 31657.9-2025標準的實施，標志著我國蜂產品藥物殘留檢測技術邁入國際先進行列。通過規范檢測方法、強化質量控制、推動技術創新，該標準將為保障蜂產品質量安全、促進產業高質量發展提供堅實支撐。未來，需持續完善標準體系，加強國際合作，共同構建全球蜂產品安全治理新格局。