酚試劑法測定蛋白質
【原理】
蛋白質和堿性銅溶液作用（雙縮脲反應）后，與銅絡合的蛋白質中所含的酪氨酸和色氨酸殘基，使磷鉬酸——磷鎢酸（Fotin-Ciocalteau酚試劑）還原呈蘭色，蘭色的深淺與芳香族氨基酸的含量成正比，故可作比色法測定。
【操作】
1．標準曲線的繪制：
取七支干燥中試管，編號，按下表操作：
混勻，放置10分鐘，每管加酚試劑0.5mL，迅速混勻。30分鐘后，以第6管為空白管，在波長650nm比色，讀取光密度。
以1—5管蛋白質濃度為橫坐標，光密度為縱坐標，作圖得標準曲線。畫好后注明所用儀器型號、編號，所用波長，測定方法及制作日期。
根據第7管光密度，由標準曲線找出其對應的濃度。并將樣品的濃度單位換算成蛋白質（g）/100mL血清。
注：
1．在用堿性銅溶液處理后，蛋白質發色能力增加3~15倍。加銅處理對酪氨酸與色氨酸的發色能力的影響較小，本法所顯顏色有1/4來源于雙縮脲反應。
2． 檢樣內蛋白質的含量應在300μg/mL以內，濃度如超出這個范圍，反應不呈線性關系。
3． 發色反應在30分鐘內即接近極限，在半小時至一小時內顏色略有增加，在1.5~6小時內顏色穩定不變，因此，最好在發色后1.5~6小時內比色。
【儀器】
1.15×15cm試管
2.刻度吸管（0.5mL，1mL，5mL）
3.721分光光度計
4.坐標計
5.微量加樣器（500μL）
【試劑】
標準牛血清清蛋白溶液：準確稱取牛血清清蛋白0.4g，溶于100mL0.9%NaCl溶液中，稀釋10倍使用。
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