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酚試劑法測定蛋白質
發布日期:2022-11-03 09:31:53


酚試劑法測定蛋白質


【原理】
蛋白質和堿性銅溶液作用(雙縮脲反應)后,與銅絡合的蛋白質中所含的酪氨酸和色氨酸殘基,使磷鉬酸——磷鎢酸(Fotin-Ciocalteau酚試劑)還原呈蘭色,蘭色的深淺與芳香族氨基酸的含量成正比,故可作比色法測定。

【操作】
1.標準曲線的繪制:
取七支
干燥試管,編號,按下表操作:
混勻,放置10分鐘,每管加酚試劑0.5mL,迅速混勻。30分鐘后,以第6管為空白管,在波長650nm比色,讀取光密度。
以1—5管蛋白質濃度為橫坐標,光密度為縱坐標,作圖得標準曲線。畫好后注明所用儀器型號、編號,所用波長,測定方法及制作日期。
根據第7管光密度,由標準曲線找出其對應的濃度。并將樣品的濃度單位換算成蛋白質(g)/100mL
血清
注:
1.在用堿性銅溶液處理后,蛋白質發色能力增加3~15倍。加銅處理對酪氨酸與色氨酸的發色能力的影響較小,本法所顯顏色有1/4來源于雙縮脲反應。
2. 檢樣內蛋白質的含量應在300μg/mL以內,濃度如超出這個范圍,反應不呈線性關系。
3. 發色反應在30分鐘內即接近極限,在半小時至一小時內顏色略有增加,在1.5~6小時內顏色穩定不變,因此,最好在發色后1.5~6小時內比色。


【儀器】
1.15×15cm試管
2.刻度
吸管(0.5mL,1mL,5mL)
3.721
分光光度計
4.坐標計
5.微量加樣器(500μL)


【試劑】
標準
牛血清清蛋白溶液:準確稱取牛血清清蛋白0.4g,溶于100mL0.9%NaCl溶液中,稀釋10倍使用。



北京天優福康生物科技有限公司

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