XTT

　材料與方法

　　1. 主要試劑：MTT、XTT、PMS、DMSO ，RPMI

　　1640（Gibco），氟尿嘧啶，注射用鹽酸阿霉素，注射用絲裂霉素Ｃ，新生小牛血清。

　　2. 細胞與細胞培養 ：人肝癌細胞系 BEL-7402置含10%新生小牛血清的RPMI

　　1640培養液中，于37℃、5% CO2的培養箱中培養。每兩天換液一次，細胞匯合后，胰酶消化，傳代。

　　3. MTT比色分析法：MTT的配制：以PBS 配制成5mg/ml貯存液，0.22μm濾膜過濾除菌，4℃避光可以保存一周，使用時以無血清培養液稀釋成1mg/ml。

　　肝癌細胞藥敏性測定：先以100μl/孔接種細胞（細胞濃度為104/ml），培養24h后，加入100μl/孔的相應藥物，再培養6d后，以50μl/孔加入MTT（1mg/ml)，繼續培養4h，棄上清液，加入150μl/孔的DMSO，振蕩，待甲簪完全溶解后，以570nm的波長測定光密度(A）值。結果以測定值減背景（本底）值表示。

　　4. XTT比色分析法：XTT的配制：以無血清培養液配制成1mg/ml，0.22μm濾膜過濾除菌，現配現用。

　　PMS的配制：以PBS配制成5～100mmol/L的貯存液，0.22μm濾膜過濾除菌，4℃避光保存，一般不超過一個月。XTT-PMS使用液：在新配制的XTT（1mg/ml）加入一定量的PMS即可，立即使用。XTT測定方法：接種肝癌細胞于96孔培養板培養，加入50μl/孔的XTT-PMS使用液，繼續培養一定時間后，振蕩，以450nm的波長測定吸光度（A）值。XTT測定肝癌細胞藥敏性操作大體同上。

　　5. 數據資料用SPSS 8.0軟件分析。

　　結果

　　1. PMS對XTT-PMS測定的影響：以103細胞每孔接種96孔培養板，培養7d，分別行MTT、XTT-PMS法測定。在無PMS的條件下，肝癌細胞代謝XTT的能力很差，PMS能顯著地促進肝癌細胞代謝XTT，PMS濃度為5μmol/L，培養2h后，XTT-PMS法測定的A值達0.66±

　　0.07，與常規MTT法測定結果(A 值為0.64±0.03）相似。隨著PMS濃度增大或培養時間的延長，A值隨著增高，但XTT-PMS所形成的本底值即背景值也隨之增大。

　　2. XTT-PMS測定肝癌細胞數的范圍：培養時間為4h、PMS濃度為5μmol/L時，XTT-PMS