流式細胞術應用 | 漂亮完成細胞因子檢測
實驗簡介
細胞因子在淋巴細胞免疫功能調節方面發揮重要作用，它可以調節多種細胞的生長、分化和功能，調節正常與病理狀態下的免疫應答。研究生理或病理免疫調節因素導致細胞因子合成的應答與改變是探尋疾病病因與免疫狀態關系的重要工具。
本實驗采用優化的一管 8 色的多色檢測方案對人外周血 T 細胞亞群的 IFN-γ、IL-17、 顆粒酶、穿孔素表達情況進行了研究。從實驗結果圖上可看出，本實驗在 CytoFLEX 上檢測時各細胞群體分群明顯，檢測結果確切可信，能夠非常漂亮地完成此類實驗。
材料與方法
? 試劑
? 樣品制備
| Sample Type | 外周血單個核細胞 |
| Species | 人 |
| Age of specimen | 樣本染色后 1 h 之內完成上機檢測 |
| Prep Method | 1. 取 200 ul 全血加 200 ul1640，并加入適量 PMA 等試劑，刺激 4 h； 2. 混勻后去 100 ul 刺激后的標本并加入相應膜抗，室溫避光孵育 20 min； 3. 加固定液，孵育后離心去上清； 4. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉速下離心 5 min 去除上清液； 5. 加破膜液混勻，并加入相應胞漿抗體適量，混勻后室溫避光，孵育 20 min； 6. 加入適量生理鹽水，1500 rpm 轉速下離心 5 min 去除上清液； 7. 重復 6； 8. 加入 300-500 ul 預冷的 PBS，混勻后上機檢測。 |
數據分析
使用 CD45/SSC 設門，選取淋巴細胞群（設邏輯門排除掉混雜的單核細胞），然后再取 CD3+T 淋巴細胞；分 別分析 Th 細胞與 TS 細胞的相關因子的表達情況。
