離心技術
離心技術是將含有微小顆粒的懸浮液置于離心轉子中,利用轉子繞軸旋轉產生的離心力將微小顆粒按密度或質量的差異將其分離的方法。
一、基本原理
1、重力場中的沉降
將含有微粒的懸浮液靜置一段時間,液體中的微粒受重力作用,使得較重的微粒下沉與液體分開,即為”重力沉降”。微粒在介質中的沉降受到介質的浮力、介質阻力和擴散現象的影響。
2、相對離心力
離心技術是根據微小顆粒在離心力場中的行為建立并發展起來的。離心機轉子能夠以穩定的角速度作圓周運動,從而產生一個強大的輻射向外的離心力場,它賦予處于其中的任何物體一個離心加速度。使之受到一個向外的離心力。離心機所產生的離心力場 G,可由下公式計算
G=ω2r ω—轉子的角速度 r—旋轉半徑(物質質點所處位置與旋轉中心的距離)
離心力場常用相對離心力RCF(Relative Centrifugal Force,RCF)來表示。相對離心力的大小用相當于地心引力(重力加速度,g)的倍數來表示,即:
RCF=ω2r/g×g=(2πn)2r/602g×g=1.119×10-5×n2r×g
N—轉子轉速,rpm/min g—重力加速度,980.6cm/s2
3、沉降速度
沉降速度是指在強大的離心力作用下,單位時間內物質顆粒沿半徑方向運動的距離。
被分離物質顆粒(或大分子)在離心管中與轉子一同旋轉時承受著沿半徑方向的直接離心力Fc作用。 Fc=Mω2r, M—被分離物質顆粒的質量。
其沉降速度v為;v=6.092×10-4×D2(ρ-ρm)n2r/ηm
D—顆粒直徑,cm;ρ和ρm分別為顆粒和介質的密度,g/cm3;ηm—介質粘度,單位帕?秒Pa?s
由此看出,顆粒沉降速度與三個方面因素有關:
a、顆粒本身性質:沉降速度與顆粒直徑和密度成正比。密度相同時大顆粒比小顆粒沉降快;大小相同時,密度大的比密度小的沉降快。
b、介質性質:沉降速度與介質粘度、密度成反比,介質粘度、密度大則顆粒沉降慢。
c、離心條件;顆粒沉降速度與離心時轉速和旋轉半徑成正比。如其它條件不變,沉降速度隨著r的增大而增大,在進行速度區帶離心時,r對沉降速度的這種影響不利于達到滿意的分離效果,所以需要在沿半徑方向上相應的增加介質的密度和粘度以克服r的增加造成的影響。
4、沉降系數
沉降系數是指在單位離心力場作用下,顆粒沉降的速度以S表示:S=v/ω2r
細胞及細胞的各種組成成分的沉降系數有很大的差異,我們可用生物樣品的沉降系數的差異采用離心技術將它們彼此分離開來。
細胞及細胞內某些沉降系數范圍和離心條件
名稱 沉降系數,S 相對離心力,g 離心轉速,r/min
細胞 >107<200 <1500
細胞核 4×106—107 600——800 3000
線粒體 2×104—7×104 7000 7000
微粒體 102—1.5×104 1×105 30000
DNA 102 2×105 40000
RNA 4—50 4×105 60000
蛋白質 2—25 >4×105 >60000
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