Folin-酚試劑法(Lowry法)測定蛋白質濃度
[目的]
掌握Lowry法測定蛋白質濃度的原理。
[原理]
蛋白質在堿性溶液中其肽鍵與Cu 2+ 螯合，形成蛋白質一銅復合物，此復合物使酚 試劑 的磷鉬酸還原，產生藍色化合物，在一定條件下，利用藍色深淺與蛋白質濃度的線性關系作標準曲線并測定樣品中蛋白質的濃度。
[操作]
取試管7支、編號、按下表操作：
立即混勻，在20℃～25℃水浴保溫30分鐘。用660nm比色，測定光密度值。
操作注意事項：
1． 按順序添加 試劑
2． 試劑乙在酸性條件下穩定，堿性條件下（試劑甲）易被破壞，因此加試劑乙后要立即混勻，加一管混勻一管，使試劑乙（磷目酸）在破壞前即被還原。
[計算]
(一)繪制標準曲線。以濃度為橫坐標，光密度值為縱坐標繪制標準曲線。
(二)以測定管光密度值，查找標準曲線，求出待測血清中蛋白質濃度(g／L)。
(三)再從標準管中選擇—管與測定管光密度相接近者，求出待測血清中蛋白質濃度(g／L)。
[器材]
(一)721型分光光度計
(二)恒溫水浴箱
(三)中 試管 7支
(四)刻度吸管：1. 0ml二支；0.5ml一支；5.0ml一支。
[試劑]
(一)試劑甲
(1)4％碳酸鈉(Na 2 CO 3 )溶液
(2)0.2N氫氧化鈉溶液
(3)1％硫酸銅溶液(CuSO 4 ·5H 2 O)
(4)2％酒石酸鉀鈉溶液(或酒石酸鉀或鈉)
在使用前(1)與(2)、(3)與(4)等體積混合，再將兩混合液按50：1比例混合，即為試劑甲。該試劑只能用一天，過期失效。
(一)試劑乙：
(1)市售酚試劑在使用前用NaOH滴定，以酚肽為指標劑，根據試劑酸度將其稀釋，使最后酸度為1N。
(2)或取Na 2 WoO 4 2H 2 O l00g和Na 2 MOO 3 25g。溶于 蒸餾 水700ml中，再加85％ H 3 PO 4 50ml和HCl(濃)100ml，將上物混合后，置1000ml圓底燒瓶中溫和地回流十小時，再加硫酸鋰(Li2SO4H2O)150g，水50ml及溴水數滴。繼續沸騰15分鐘后以除去剩余的溴，冷卻后稀釋至1000ml然后過濾，溶液應呈黃色或金黃色(如帶綠色者不能用)，置于棕色瓶中保存，使用時用標準NaOH滴定，以酚酞為指示劑，而后稀釋約一倍，使最后酸度為1N。
(三)標準蛋白質溶液
用結晶牛血清白蛋白，根據其純度用 蒸餾 水配制成0.25mg／ml的蛋白質溶液。(純度可經凱氏定氮法測定蛋白質含量而確定)。
(四)待測樣品：準確取 血清 0.1ml，置于50ml 容量瓶 中，再加0.9％NaCl溶液至刻度，充分混勻，也可以用尿液為樣品。
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