血清三酰甘油的含量測定
【 實驗目的 】
1.掌握測定三酰甘油的原理和方法。
2.了解血清三酰甘油的正常值及臨床意義。
【實驗原理】
三酰甘油的主要生理功能是儲能和供能，主要分布在皮下、腹腔大網膜、腸系膜、內臟周圍等脂肪組織中。在血清中，內源性三酰甘油主要以VLDL的形式運輸，外源性三酰甘油主要以CM的形式運輸。在正常成人空腹血脂中，三酰甘油的含量為0.11～1.69(均值為1.13)。血脂的含量受膳食、種族、性別、年齡、職業、運動狀況、生理狀態以及激素水平等多因素影響，波動范圍較大。例如：青年人血漿膽固醇水平低于老年人，某些疾病時，血脂含量有很大變化，如糖尿病和動脈粥樣硬化的患者，血脂一般都明顯升高。因此，測定血脂的含量在臨床上具有重要的意義。
用正庚烷-異丙醇聯合抽提血中的三酰甘油，再用KOH皂化抽提液，生成甘油，然后用過碘酸鈉氧化甘油，生成甲醛，最后甲醛與乙酰丙酮及氨縮合，生成帶黃色熒光的3,5 —二乙?！?,4—雙氫二甲基吡啶。
【 器材和 試劑 】
1.器材 試管及試管架、混勻器、恒溫水浴箱、微量加樣器、吸量管、吸耳球、可見光分光光度計、比色杯、記號筆。
2. 試劑
(1)新鮮血清。
(2)抽提劑為正庚烷—異丙醇(2∶3.5)(V／V)。
(3)0.04mol/L H 2 SO 4 溶液。
(4)異丙醇。
(5)皂化試劑： 6.0g/> KOH溶于60ml蒸餾水中，加異丙醇10ml混合，置棕色瓶中,室溫
保存。
(6)氧化試劑：650mg過碘酸鈉溶于約100ml蒸餾水中，加入 77g/>醋酸銨，溶解后再加
入60ml冰醋酸，加水至1000ml，置棕色瓶中室溫保存。
(7)乙酰丙酮試劑：0.4ml乙酰丙酮加異丙醇至100ml，置棕色瓶中，室溫保存。
(8)三酰甘油標準液：精確稱取三酰甘油酯 1.00g/>于100ml容量瓶中，加抽提劑至刻度,此為儲存標準液( 10g/>／L)。臨用時，再以抽提劑稀釋10倍，即得 1g/>/L應用液，冰箱保存。
【操作步驟】
1.取干 試管 3支，編號，按下表準確加入試劑：
試劑
| 空白管
| 標準管
| 測定管
|
血清（ml）
| —
| —
| 0.2
|
標準液（ml）
| —
| 0.2
| —
|
蒸餾水（ml）
| 0.2
| —
| —
|
抽提劑（ml）
| 2
| 2
| 2
|
0.04mol/LH 2 SO 4 (ml)
| 0.6
| 0.6
| 0.6
|
邊加邊搖，加畢劇烈振搖25min，然后靜置分層。
2.另取3支同樣編號的干 試管 ，各加上層液0.3～0.5ml（三管液量相等），再加異丙醇
2ml及皂化劑0.4ml，立即搖勻，于 65℃/>保溫5min。
3.各管加入氧化劑2ml及乙酰丙酮試劑2ml，充分混勻。至 65℃/> 水浴 保溫15min，用
冷水冷卻，以420nm波長或藍色濾光片比色，以空白管校正零點，讀取各管吸光度。
【計算】
血清 三酰甘油mmol/L＝（測定管吸光度/標準管吸光度）×0.2×100÷0.2×0.011
＝（測定管吸光度/標準管吸光度）×1.1
正常值=0.22～1.21mmol/L
【附注】
1.本試驗受檢者需空腹12～14小時。
2.乙酰丙酮的吸收峰在波長415nm左右。
3.計算公式中的0.11為mg/L換算成mmol/L的系數。
4.本法用廉價庚烷作為與異丙醇的混合抽提劑。此外，如辛烷或壬烷以及沸程在 98.4～ 150.70℃/>的石油醚均可采用。故抽提劑也可用汽油-異丙醇。
【思考題】
實驗中，H 2 SO 4 的作用是什么？
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