異硫氰酸胍法
異硫氰酸胍法提取制備模板核酸此法主要用于RNA的提取.標(biāo)本為組織細(xì)胞及血清等.
1.異硫氰酸胍消化液
異硫氰酸胍4mol/L
檸檬酸鈉(PH7.0)25mmol/L
十二烷基肌酸鈉0.5%
β-巰基乙醇0.1mol/L
2.消化方法:用50～100ul細(xì)胞懸液及血清，加等體積的異硫氰酸胍消化液振混勻 后，或65℃1小時(shí)，或室溫放置數(shù)分鐘，然后加1/10體積的3mmol/L pH5.2的醋酸鈉緩 沖液，再加等體積的酚:氯仿，用力振搖約10s，10000r/min，離心5min，取上清加等 體積異丙醇-20℃放置3h后，14000r/min離心15min，沉定用75%冰冷乙醇離心洗滌1～ 2次，真空干燥，沉淀用TE緩沖液溶解即可用于逆轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增，或放-20℃保存.
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