固相肽的合成
本實驗中由苯胺和醋酸經(jīng)高溫脫水而生成酰胺，由于反應(yīng)溫度高，會引起反應(yīng)原料苯胺的氧化，所以此反應(yīng)中加入還原劑金屬鋅以抑制苯胺的高溫氧化。
本實驗中產(chǎn)品是經(jīng)水結(jié)晶而純化的，結(jié)晶是最簡單、有效、經(jīng)濟的純化手段，結(jié)晶時常有少量絮狀物不溶，導(dǎo)致加入過多溶劑形成不飽和溶液，使結(jié)晶收率低或不結(jié)晶。為此結(jié)晶溶液需過濾除去絮狀不溶物雜質(zhì)，對于遇冷結(jié)晶的溶液需保溫過濾。為了得到好的結(jié)晶，常需保溫結(jié)晶，結(jié)晶時間較長。
酰胺鍵是構(gòu)成生物體內(nèi)蛋白質(zhì)的重要共價鍵，是由氨基酸合成多肽、蛋白質(zhì)類化合物的重要合成方法。本實驗所用的方法條件苛刻，不適用于此類目的。
目前合成多肽的方法主要有液相合成法和固相合成法。在液相肽合成中，每次接肽以后都需要對產(chǎn)物分離純化或結(jié)晶以便除去未反應(yīng)的原料和副產(chǎn)物。這個步驟相當費時間而且麻煩，因操作帶來的損失往往也很大。
為了減少這個麻煩并期望能夠使接肽反應(yīng)自動化，麥瑞菲爾德（Merrifield）于1963年發(fā)展成功了固相肽合成方法，他用這個方法獲得了結(jié)晶的LeuAlaGlyVal四肽。與之差不多同時，勒辛格（Letsinger）和柯爾內(nèi)特（Kornet）也用固相載體經(jīng)不同的化學途徑合成了LeuGly。
以后又經(jīng)過麥瑞菲爾德本人以及其它實驗室對這個方法進行不斷的改進和完善，使之到今天已經(jīng)成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用的技術(shù)。為此麥瑞菲爾德獲得了1984年諾貝爾化學獎。
固相合成的主要設(shè)計思想是：先將所要合成肽鏈的羧末端氨基酸的羧基以共價鍵的結(jié)構(gòu)同一個不溶性的高分子樹脂相連，然后以此結(jié)合在固相載體上的氨基酸作為氨基組分經(jīng)過脫去氨基保護基并同過量的活化羧基組分反應(yīng)接長肽鏈。
這樣的步驟可以重復(fù)的多次進行下去，即縮合——洗滌——去保護——中和和洗滌——下一輪縮合，最后達到所需要合成的肽鏈長度。
固相合成反應(yīng)的基礎(chǔ)是液相合成。
由于在液相合成中最普遍采用的是以羧基活化的方式進行接肽，因此在固相合成中也多同樣采用上述的將氨基組分掛在固相樹脂上而向氨端伸長肽鏈的方式，因為這有利于采用過量的活化羧基組分以促使縮合反應(yīng)接近于完全，而過量的羧基組分則又由于其存在于溶液之中，可以通過過濾和洗滌的方法很容易地除去。
用于肽合成的高分子載體主要有四類。即不同交聯(lián)度的聚苯乙烯-苯二乙烯交聯(lián)樹脂；不同比例N,N-乙烯基-雙-丙烯酰胺樹脂；聚乙二醇；無交聯(lián)的聚苯乙烯。
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