血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>
1．掌握電泳法分離血清蛋白質(zhì)的原理。
2. 掌握血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳的操作方法。
3．測定人血清中各種蛋白質(zhì)的相對(duì)百分含量。
二、實(shí)驗(yàn)原理
帶電粒子在電場中向與其電性相反的電極方向泳動(dòng)的現(xiàn)象稱為電泳。血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)在pH4.0～7.3之間，在pH8.6的緩沖溶液中均帶負(fù)電荷，在電場中向正極泳動(dòng)。血清中各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，所以帶電荷量也不同。此外各種蛋白質(zhì)的分子大小各有差異，因此在同一電場中泳動(dòng)的速度不同。分子小而帶電荷多者，泳動(dòng)較快；反之，則較慢。
采用醋酸纖維素薄膜為支持物的電泳方法，稱為醋酸纖維素薄膜電泳。該膜具有均一的泡沫狀結(jié)構(gòu)（厚約120μm），滲透性強(qiáng)，對(duì)分子移動(dòng)的阻力很弱。用其作支持物進(jìn)行電泳，具有微量、快速、簡便、分離清晰、對(duì)樣品無吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。現(xiàn)已廣泛用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血紅蛋白、酶的分離和免疫電泳等方面。
經(jīng)醋酸纖維素薄膜電泳可將血清蛋白按電泳速度分為5條區(qū)帶，從正極端依次為清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白及γ球蛋白，經(jīng)染色可計(jì)算出各蛋白質(zhì)的百分含量。
三、實(shí)驗(yàn)器材
1. 電泳儀：為電泳提供直流電源。
2. 電泳槽：為電泳提供場所。多用有機(jī)玻璃制成，電極用鉑絲。
3. 血清加樣器 ：可用蓋玻片或X膠片或微量加樣器。
4. 醋酸纖維素薄膜：2cm×8cm
5. 其它： 培養(yǎng)皿（直徑9-10cm）、濾紙、玻璃板、鑷子等。
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