免疫電泳（Immunoelectrophoresis）
【原理】
免疫電泳法是指利用凝膠電泳與雙向免疫擴(kuò)散兩種技術(shù)結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法。在電場(chǎng)作用下標(biāo)本中各組分因電泳遷移率不同而分成區(qū)帶，然后沿電泳平行方向?qū)⒛z挖一溝槽，將抗體加入溝槽內(nèi)，使抗原 與抗體相互擴(kuò)散而形成沉淀線。根據(jù)沉淀線的數(shù)量、位置及形狀，以分析標(biāo)本中所含組分的性質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)常用于抗原分析及免疫性疾病的診斷。
【材料】
1%離子瓊脂 （pH8.6巴比妥緩沖液加入等量蒸餾水，再加入1%瓊脂，溶解后用脫脂棉過(guò)濾，分裝試管，實(shí)驗(yàn)前加熱溶解置56~60℃水浴箱中平衡溫度備用）。
免疫 電泳用玻片
待檢血清
人IgG（1mg/ml）
抗人全血清抗體
微量加樣器及塑料吸頭
尖吸管及橡皮吸頭
打孔器、解剖刀、尺、打孔模板、濕盒等。
電泳儀：將pH8.6巴比妥緩沖液注入電泳槽內(nèi)（注意正負(fù)極各槽內(nèi)所加入的量應(yīng)在同一水平），并將濾紙裁成適當(dāng)長(zhǎng)度和寬度以備搭橋使用。
附：pH8.6巴比妥緩沖液配制方法
巴比妥鈉（Barbital Sodium）10.3g
巴比妥酸（Barbituric Acid）1.84g
蒸餾水1000ml
1．稱量巴比妥酸置一三角燒瓶中加蒸餾水200ml于煮鍋內(nèi)加熱溶解。
2．稱量巴比妥鈉置另一容器中加蒸餾水700ml，搖動(dòng)溶解。
3．將已融化的巴比妥酸溶液與巴比妥鈉溶液混合，用蒸餾水補(bǔ)足1000ml。
4．混勻后，用精密pH試紙測(cè)定pH值，備用。
一、實(shí)驗(yàn)方法：
1．取已溶化的1%離子瓊脂傾注于玻片上制成瓊脂板。
2．冷卻凝固后，按照模板于挖槽線上下兩側(cè)各打孔一個(gè)，并分別用微量加樣器加入待檢血清及人IgG各15μl。
3．置電泳槽內(nèi)，注意電泳標(biāo)本應(yīng)放負(fù)極“―”一側(cè)。并將已浸透緩沖液的濾紙一端覆蓋于瓊脂板兩側(cè)各約0.5mm，另一端浸于電泳液中。
4．接通電源。電壓、電流及時(shí)間應(yīng)視儀器性能而定。一般電勢(shì)梯度6V/cm，電流每板20mA，泳動(dòng)時(shí)間1~2小時(shí)。
5．電泳完畢，關(guān)閉電源，取出瓊脂板。按模板位置用解剖刀挖橫槽，用特制尖吸管加入抗人全血清抗體。
6．置濕盒中，于37℃溫箱中擴(kuò)散24小時(shí)。
【結(jié)果】
根據(jù)沉淀弧的位置及形狀，參照免疫球蛋白遷移范圍示意圖，識(shí)別主要Ig。
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