培養(yǎng)基母液的配置注意事項(xiàng)

• 細(xì)胞培養(yǎng)基的配制 細(xì)胞培養(yǎng)專題

培養(yǎng)基 配制通常先根據(jù)各組分性質(zhì)，配制成較濃的母液(母液濃度為培養(yǎng)基濃度的若干倍如50或100倍)，貯存在冰箱中備用，以后配制培養(yǎng)基時(shí)根據(jù)用量量取。由于培養(yǎng)基成分較多，如果每配制一次即進(jìn)行多次稱量(不少成分用量較微)，不僅會(huì)造成較大的誤差，而且會(huì)增加工作量，因而配制母液可使培養(yǎng)基配制方便準(zhǔn)確。配制大量成分母液通常為原培養(yǎng)基濃度的20、50或100倍，倍數(shù)不宜過高。MS培養(yǎng)基母液及培養(yǎng)基配方法參考表2。

大量成分母液經(jīng)常將CaCl2·2H2O單獨(dú)配制 保存，以免長期貯存發(fā)生沉淀。若將全部大量成分配在一起時(shí)，為防止在混合時(shí)發(fā)生沉淀，須在各藥品充分溶解后，按表1.2中化合物出現(xiàn)順序混合，氯化鈣最后加入，以免與硫酸鎂形成沉淀.大量成分稱量溶解后，在1000 ml容量瓶中定 容，然后移入磨口瓶中，貼上標(biāo)簽，置于普通冰箱(4℃)貯存。

微量元素母液配制時(shí)，由于培養(yǎng) 基中微量元素用量甚微，濃度為0.l~0.0001mg/l，所以母液濃度宜為原培養(yǎng)基配方中用量的100倍。一般將微量元素分別稱量溶解，定容在1000 ml容量瓶中后貯存在一個(gè)細(xì)口瓶中，但也有將KI分別配制，單獨(dú)貯存在棕色瓶中。配好后，貼上標(biāo)簽，貯存于4℃冰箱。

培養(yǎng)基中的鐵鹽母液一般單獨(dú)配制。目前常用的鐵鹽為硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二納的螯合物。稱取Na2-EDTA 3.73 g，F(xiàn)eSO4 ·2H2O 2.78 g，分別溶解(可加熱)，然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。轉(zhuǎn)入細(xì)口瓶，貼上標(biāo)簽，4℃冰箱中保存。

氨基酸和維生素等有機(jī)成分母液可配制時(shí)，母液濃度通常為原培養(yǎng)基配方的50倍(或100)。常用氨基酸和維生素為水溶性物質(zhì)，可用蒸餾水溶解，但葉酸要先用少量稀堿或稀氨水溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好后，轉(zhuǎn)入細(xì)口瓶，貼上標(biāo)簽，-20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)如生長素類和細(xì)胞分裂素類可以根據(jù)需要，靈活設(shè)計(jì)其濃度，一般為 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。如配0.5 mg/l NAA母液，稱25 mg NAA溶于50 ml重蒸餾水，或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸餾水中。IAA要用棕色瓶暗中貯存，以免光照分解。常用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和維生素特征見表3。生長素為醇溶性物質(zhì)，配制時(shí)，應(yīng)用少量95%酒精或稀堿溶解，然后用重蒸餾水溶解定容;細(xì)胞分裂素應(yīng)先用少量1 N NaOH或HCl溶解，然后用重蒸餾水定容。配制好的母液放置在4℃普通冰箱中備用。這些母液保存時(shí)間不宜過長，當(dāng)出現(xiàn)沉淀、渾濁及霉菌團(tuán)時(shí)，應(yīng)重新配制。

椰乳中因含有許多種細(xì)胞分裂素物質(zhì)，如KT類似物(9-β-D-ribofuranosylzeatin)、玉米素及玉米素核糖甙等，有時(shí)可與細(xì)胞分裂素相互代替。采集到椰子時(shí)，應(yīng)檢查其汁液(保證沒有變質(zhì))，煮沸，濾紙過濾掉蛋白，高溫高壓消毒，貯存在-20℃下備用。有時(shí)可直接加入培養(yǎng)基。酵母提取液也一般也現(xiàn)用現(xiàn)配，稱量酵母粉后，加熱至沸騰30分鐘，過濾去渣。

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