DH5a感受態(tài)細胞的制備

1．挑取-20℃保存的DH5а單菌落接種于3ml的LB液體培養(yǎng)基中，37℃160r/min培養(yǎng)過夜（此為一級培養(yǎng)）

2．將一級培養(yǎng)菌液接2%的量接種于5ml新鮮LB液體培養(yǎng)基中，37℃，200r/min,培養(yǎng)2.5~3.0h，使細菌進入對數生長期。（OD600=0.6左右）
 

3．將二級培養(yǎng)產物分裝到1.5ml離心管，冰浴30min.
 

4. 4000r/min離心10min,棄上清。
 

5．加750ul0.1mol/l冷CaCL2液懸浮菌體。
 

6．4000r/min，棄上清，加入80ul預冷的CaCL2（0.1mol/l）重懸菌體。
 

7. 制備好的感受態(tài)課冰浴過夜（不課超過48ml）成直接用于轉化或加無菌甘油（15~20%）―70℃長期保存。

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